蛋白电泳煮沸到底是什么作用

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  jxsrzhb521 2017-04-01 00:00:00

  肯定是可以用的！

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  饭桶877 2017-04-01 00:00:00

  煮沸是让蛋白质变性，正常的SDS-PAGE，在SDS、还原剂和煮沸的作用下，蛋白质的二级三级结构都被破坏，二硫键也被打开，蛋白变为线性，且跟大量SDS结合，SDS的负电荷屏蔽了蛋白本身带的电荷，这样，各种蛋白跑得快慢就只跟分子量大小有关。你的实验中使用的是非还原上样buffer，如果目的蛋白中有二硫键，就无法打开，尤其是没煮过的，可能还保留一定的结构和构象，这样蛋白的迁移率还受蛋白构象影响，跑得稍快可能是跟煮过的相比，其构象更紧密的原因。至于为什么没煮过的更接近真实分子量，那是因为你用的上样buffer是非还原的，连Marker的迁移率也不是只跟分子量相关了。要想准确反映分子量，还是要按标准的SDS-PAGE操作，使用还原上样buffer，煮沸样品。

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