请教：CTAB法提取植物DNA的问题

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  sunmoon9927 2017-01-17 00:00:00

  CTAB法提取植物DNA的问题 提取植物DNA常用的方法是CTAB法.原理：CTAB是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.步骤如下： 1）取材料，加液氮研磨成粉末状，迅速移入1.5 ml Eppendorf管中； （2）加入800 μl的CTAB提取缓冲液，混匀（CTAB在65℃水浴预热），每5min轻轻震荡几次，20min后12000 r/min，离心15 min； （3）小心吸取上清液，加入等体积的酚：氯仿（各400μl）溶液，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min； （4）小心吸取上清液，加入等体积的氯仿，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min. （5）重复步骤（4）1-2次，以蛋白层不出现为止； （6）取上清，-20℃沉淀1h，4℃，12000 r/min，离心10 min； （7）弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀2次； （8）室温下干燥后（一般干燥5-15 min），溶于30-50 μl DEPC去离子水中，于-20℃或者-70℃下保存备用.

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