进行双向电泳实验,如何提取大鼠骨骼肌蛋白样品?
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我要进行双向电泳实验,骨骼肌组织已经取下来了,接下来要进行蛋白提取了,心里没底,在咨询一下啊,Z好给我一下具体步骤,和一些溶液的配方及配制的量,谢谢啊!
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- 小小玲玲玲玲9 2011-12-01 00:00:00
- 可以使用以下产品,上海生工有卖的 PL042 Extraction buffer VI: Urea ,Thiourea , NDSB201 powder, diluent: CHAPS
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简介
食品制造商需要提取脂肪。 通常,必须使用酸对食品样品进行预水解,以便在提取过程中回收其总脂肪。 例如,在低于正常脂肪提取温度的情况下,发生化学变化的食物(如鸡蛋)需要此步骤。使用这个操作程序从需要预水解的食 品中,用酸水解的方式提取脂肪,对于用户而言,在他们的实验室中这个步骤是必须的。
样品类型
含有结合脂肪的食物或用户想要水解的任何食物。 但是请不要使用这种方法从肉类中提取脂肪。
样品准备
1. 研磨或均质食品样品。
注意:食物含水多吗?研磨前,请在 100 °C 的烘箱中预干燥样品 1 小时。
2.称取 3 g 或更少的食物样品放入玻璃烧杯中。记录重量。
注意:对于坚果酱等脂肪较多的食物,请使用较小的样本量(2 克或更少)。
3. 向样品中加入 45 mL 沸水。然后,向样品中添加 55 mL 的 8 M HCl。
4. 用玻璃搅拌棒搅拌混合物,用表面皿盖住混合物,并使用加热板或加热块使样品沸腾 1 小时。混合物会变 成黑色的变体。
5. 将混合物从火上移开,让它摸起来冷却。
6. 使用 Whatman 1 过滤器组装过滤装置。
注意:过滤装置可以是放置在带有真空的过滤瓶中的布氏漏斗中的过滤器,也可以是放置在带有烧瓶下方的 漏斗中的过滤器,允许样品通过重力滴入。
7. 将样品转移到过滤组件中,让过滤器收集黑色水解产物。用 100 mL 水冲洗原始样品烧杯,以转移可能留 在烧杯中的任何水解产物
8. 从过滤装置中取出过滤器。在 100 °C 下烘箱干燥过滤器 1 小时。
9. 通过将 G0 Q-Disc 插入 Q-Cup 的底部,然后在顶部放置 Q-Support 来准备 Q-Cup。
注意:EDGE方法编程时请选择G0作为EDGE方法中的Q-Disc
10. 将干燥的过滤器插入 Q-Cup 的顶部。
注意:过滤器可能会被撕裂或穿孔,而不会降低脂肪回收率。如果使用的过滤器很大,可以将它们撕开以 更好地安装在 Q-Cup 内。
11. 在折叠过滤器的顶部放置一个 Q-Screen,然后使用 Q-Screen 工具将过滤器压缩到 Q-Cup 中。
12. 将 Q-Cup 放在 EDGE 架上。将预先称重的小瓶与架子上记录的重量放在一起。
EDGE萃取
13. 通过用石油醚或所需溶剂灌注溶剂管线并在下面的 EDGE 方法中编程来准备 EDGE。
14. 使用下面的 EDGE 方法提取样品。
注意:此方法需要两个 40 mL 或 60 mL 小瓶。
萃取的后续工作
15. 从架子上取下萃取瓶。
注意:如果样品的脂肪含量较高,则所得提取物可能呈黄色。
16. 将样品瓶置于 60 °C 的蒸发器中,让所有溶剂蒸发。
注意:脂肪将作为油性粘稠层保留在小瓶底部。
17. 将样品瓶放入 100 °C 的烘箱中 1 小时,以去除任何残留的水分或溶剂。
18. 让小瓶冷却并称重。
其中小瓶之后是蒸发后小瓶的重量,小瓶之前是提取前小瓶的重量。
方法开发技巧
以下方法是适用于大多数样品类型的保守方法。请注意,可能有针对特定样品的更优化方法。请联系 Molecular Support以获取更多信息。
文献中有许多可用的酸水解方法。任何方法都可以,只要将黑色水解产物过滤,用水彻底冲洗,并用可干燥 和提取的过滤器捕获即可。
其他提取溶剂,如乙酉迷和己烷,可用于提取脂肪。
如果此方法的回收率低于预期,则将每个循环的保持时间增加 1 分钟。此外,如果可能,请考虑增加总提 取量或减少样本量。
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大鼠实验动物血压测量:评估与方法应用
在医学与生物研究领域,大鼠作为常见的实验动物,广泛应用于药物研发、疾病机制研究及生理功能探索等各个方面。其中,血压测量作为基础生理指标之一,对评估动物健康状态和药物效果至关重要。本文将探讨大鼠血压测量的常用方法,测量精度及其在科研中的应用,帮助科研人员在实验设计和数据分析时做出合理选择。
大鼠血压测量的重要性
血压是维持生理平衡和生命活动的关键指标之一,它反映了心脏、血管及其他相关系统的健康状况。在大鼠实验中,准确测量血压不仅有助于了解动物的生理状态,还能够帮助科学家们研究高血压、心血管疾病等慢性疾病的发生机制,评估抗高血压药物的效果。随着研究技术的不断进步,血压测量已成为探索生理和病理变化的重要工具。
常见的血压测量方法
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尾动脉法(Tail-cuff method)
尾动脉法是目前为常用的大鼠血压测量方法之一。此方法通过将动物的尾巴暴露于温热环境中,使血管扩张,再通过压力计测量血压。虽然尾动脉法操作简便,适用于大量动物样本,但该方法可能受到动物应激反应的影响,导致测量结果的波动。因此,尾动脉法更适用于正常血压的初步筛查。
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直视血压法(Invasive method)
直视血压法,也被称为动脉插管法,是一种侵入性较强的方法。该方法通过将微型传感器直接植入大鼠的动脉,实时测量血压。这种方法的精确度高,能够获得大鼠在不同生理状态下的血压波动,常用于高血压药物研究或疾病模型的深入探索。因其需要对动物进行手术,因此不适用于大量筛查,且需处理相关伦理问题。
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间接动态血压测量法(Oscillometric method)
间接动态血压测量法通过监测大鼠肢体周围的压力变化来推算血压。与尾动脉法类似,该方法通过仪器测量大鼠肢体(如尾巴、后肢等)部位的血流压力波动,推导出血压值。相比于尾动脉法,这种方法对动物的应激反应较小,测量的稳定性较好,适合用于长期监测。
测量方法的选择与优化
根据实验目的和动物状态的不同,选择合适的血压测量方法至关重要。对于非侵入性研究,尾动脉法和间接动态测量法更为常用,前者适用于常规筛查,而后者则适合长期观察。对于需要高度数据的药物开发和疾病研究,动脉插管法是更为理想的选择,尽管其操作难度和伦理问题较为复杂。
结论与展望
大鼠作为实验动物,血压测量在科学研究中占据了重要地位。从非侵入性到侵入性方法,不同的测量技术满足了不同研究需求。随着技术的进步和测量精度的提高,未来的血压测量技术将更加,并能够在更广泛的研究领域得到应用。科研人员应根据实验目的与实际情况选择合适的测量方法,以保证研究结果的科学性与可靠性。
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骨骼牙齿的粉碎,是法庭科学生物重要物证检测,对案事件现场提取的骨骼牙齿等坚硬的物证通常要进行粉碎研磨,通过对骨骼牙齿等物证进行粉碎后可以直接进行基因分型检验分析得到受害人或遇难者的相关基因信息。而上海净信法医骨骼牙齿粉碎仪可更好的研磨粉碎骨骼牙齿,保留其相关基因信息。
一、骨骼牙齿粉碎仪
1、上海净信冷冻骨骼牙齿粉碎仪,主要应用于DNA实验室检测骨骼和牙齿的前处理或其化需要将牙齿骨骼粉碎使用领域。
2、粉碎过程采用一次性或可重复灭菌消毒的粉碎罐,可以防止污染环境和交叉污染,具有较高的实用价值。
3、低温研磨样品能够有效抑制核酸降解、保留蛋白质活性,轻松处理常规方法难以处理的样品,研磨效果具有高度可重现性。
二、骨骼牙齿粉碎仪
1、低温研磨不破坏样品成分,能够有效抑制核酸降解,保留蛋白质活性;
2、高通量处理量,一次处理多达192个样品;
3、全封闭状态研磨,避免交叉污染;
4、研磨效果好,出料粒度5um;
5、内置程序控制器,可对参数进行设置;
6、可用于对样品的组织均质/研磨/细胞破碎/匀浆/材料分散/制备/振荡;
7、......
三、粉碎仪研磨实验案例效果图
1、法医骨骼牙齿粉碎仪对样品的研磨实验案例效果图
四、粉碎仪的使用注意事项
1、仪器应放置在干燥通风的环境中;
2、仪器工作电压为220V;
3、使用液氮时,应做好防护措施,防止冻伤;
4、在研磨开始前固定好适配器,旋紧垂直定位螺旋,将安全锁扣紧;
5、样品尽量对称放置,以保证研磨时的受力平衡;
6、研磨完毕后请关闭电源,将安全锁归位;
7、定期清理适配器,防止残留的药品或样品对其造成腐蚀。
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