听说过溴化乙锭吗，是致癌物质吗？

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  ccccccmandy 2017-10-08 00:00:00

  　　英文名：Ethidium bromide 　　分子量： 394.3139 g/mol 　　熔点：260 - 262 °C 　　为芳香族荧光化合物 　　EB（Ethidium bromide，溴化乙锭） 　　溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。 　　溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。溴化乙锭是强诱变剂，具有高致癌性! 　　观察琼脂糖凝胶中DNAZ常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的DNA条带。 　　溴化乙锭可以用来检测单链或双链核酸（DNA或RNA）。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小，所以其荧光产率也相对较低。事实上，大多数对单链DNA或RNA染色的荧光时通过染料结合到分子内形成较短的链内螺旋产生的。 　　尽管在该染料存在的情况下，线状DNA的电泳迁移率约降低15%，因此，当需要知道DNA片段的准确大小（如DNA限制酶酶切图谱的鉴定），凝胶应该在无EB情况下电泳，电泳结束后用EB染色。染色完毕后，通常不需要脱色。但是在检测小量DNA（小于10ng）片段时，通常要将染色后的凝胶进行脱色。 　　溴化乙锭的损害 　　溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。溴化乙锭是强诱变剂，具有高致癌性！ 　　SYBR Green I 和溴化乙啶（EB）Ames 测试结果显示EB容易引起有机体突变。(Singer et al.， Mutat. Res. 199， 439: 37- 47.) 　　溴化乙锭溶液的净化处理 　　由于溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。 　　(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理： 　　①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml； 　　②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的25mol/L HCl，混匀，置室温数小时； 　　③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。 　　(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理： 　　① 按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时； 　　② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

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