如何用ELISA试剂盒做抗肿瘤活性

　　elisa实验：怎么保存ELISA试剂盒?

　　(1)要留心避免出现严峻溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因而，在以HRP为符号酶的ELISA试剂盒测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很简单在温育进程中吸附于固相，然后与后边参与的HRP底物反响显色。

　　(2)样本的收集及血清别离中要留心尽量避免细菌污染，一则细菌的成长，其所分泌的一些酶或许会对抗原抗体等蛋白发作分化效果;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作符号的测定方法发作非特异性搅扰。

　　(3)血清标本如是以无菌操作别离，则可以在2～8℃下保存一周，ELISA试剂盒如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长期保存，应在-70℃以下。

　　(4)冰冻保存的血清标本须留心避免因停电等形成的重复冻融。ELISA试剂盒标本的重复冻融所发作的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发作损坏效果，然后引起假阴性效果。此外，冻融标本的混匀亦应留心，不要进行剧烈振动，重复倒置混匀即可。

　　(5)标本在保存中如出现细菌污染所形成的的混浊或絮状物时，应离心沉积后取上清检测。Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的试验确诊方法。因为其试剂安稳、易保存，操作简洁，效果判断较客观等要素，已广泛应用在免疫学查验的各领域中。ELISA试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。成长环境之中的有用因子和营养成分进行更好的了解，确保这种血清原材料的成长活性和可靠性更高，以更加的品质让这种动物细胞培养的活性得到大幅度的提升;

　　ELISA试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

　　仅供体外研究使用

　　本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠(Acetyl-Foxo3a)的含量。

　　有效期：6个月

　　保存条件：2-8℃

　　[实验原理]

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被肿瘤坏死因子α捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成ZZ的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α呈正相关。用酶标仪在450nm  波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

　　[样本处理及要求]

　　1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20  分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃  1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M,   pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶YZ剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

　　4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　注：标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

　　[需要而未提供的试剂和器材]

　　1.酶标仪(450nm)

　　2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒温箱

　　4.蒸馏水或去离子水

　　[试剂盒组成]

　　1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 ; 2 酶标试剂 6ml×1 瓶

　　3 酶标包被板 12 孔×8 条 ; 4 样品稀释液 6ml×1 瓶

　　5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 ; 6 显色剂B 液 6ml×1/瓶

　　7 终止液 6ml×1 瓶; 8 标准品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

　　9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶; 10 说明书 1 份

　　11 封板膜 2 张; 12 密封袋 1 个

　　肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 【备注】：

　　1. 标准品浓度依次为：600、300、150、75、37.5、18.75 ng/mL

　　2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

　　[注意事项]

　　1.严格按照规定的时间和温度进行温育以准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

　　2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

　　3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

　　4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

　　5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

　　6.在储存和温育时避免强光直接照射。

　　7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

　　8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

　　9.不能使用过期产品。

　　10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

　　[试剂准备]

　　试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

　　[操作步骤]

　　1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

　　3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

　　4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7. 每孔加入终止液50μL，15min内，大鼠(Acetyl-Foxo3a)试剂盒在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　[实验结果计算]

　　以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度值。

　　(此图仅供参考)

　　肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒[性能]

　　1. 检测范围：18.75 ng/mL – 600 ng/mL。

　　2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 ng/mL。

　　3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

　　4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。