草甘膦检测为什么一定要用阴离子检测

       草甘膦是一种非选择性、无残留灭生性除草剂，对多年生根杂草非常有效，广泛用于橡胶、桑、茶、果园及甘蔗地。草甘膦的使用量逐年增加，给农作物、人类健康以及生态环境带来了一定的安全隐患。目前常用草甘膦及其代谢物的检测方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题。

方法优势

　　迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了水果中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的测定SPE-UPLC-MS/MS法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取专用柱净化样品，收集流出液，Dikma Polyamino HILIC色谱柱分离检测，该方法特点：

       1) 前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可；

       2) 有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂；

       3) 仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本；

       4) 方法定量限0.05 mg/kg。

       以下为详细解决方案，敬请参考！

水果中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法

01 适用范围

       本方法适用于苹果和橘子中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.05 mg/kg。

02 标准品配制

       单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。

       混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/mL和10 μg/mL的混标标准中间液。

03 提取

       取2 g样品于50 mL离心管中，加入8 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取全部上清液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，取5 mL，待净化。

04 净化

       ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938）

       1.活化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；

       2.上样：将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。

       注：同方法制备基质匹配标准溶液。

05 UPLC-MS/MS条件

5.1 UPLC条件

       色谱柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)

       流速：0.2 mL/min      

       进样量：10 μL

       柱  温：35 ℃

       流动相：A:乙腈 B:5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11

       梯度设置：

5.2 质谱条件

       电离模式：ESI

       扫描方式：负离子扫描 

       检测方式：多反应监测    

       电喷雾电压：-4500 V

       雾化气压力：60 psi       

       辅助气压力：60 psi

       气帘气压力：35 psi       

       离子源温度：550 ℃

       定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表：

06 添加回收结果

       水果中草甘膦和氨甲基膦酸的SPE-UPLC-MS/MS检测添加回收结果：

草甘膦10 ng/mL标准品XIC图

草甘膦50ng/mL标准品XIC图

草甘膦100ng/mL标准品XIC图

草甘膦250 ng/mL标准品XIC图

草甘膦500 ng/mL标准品XIC图

草甘膦的标准曲线图

R^2= 0.9990

标准曲线浓度分别为: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL

氨甲基膦酸10 ng/mL标准品XIC图

氨甲基膦酸50 ng/mL标准品XIC图

氨甲基膦酸100 ng/mL标准品XIC图

氨甲基瞵酸250ng/mL标准品XIC图

氨甲基膦酸500ng/mL标准品XIC图

氨甲基膦酸的标准曲线图

R^2= 0.9990

标准曲线浓度分别为: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL

07 相关产品

       水果中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息：

普仁离子色谱仪对草甘膦中的离子成分和含量检测具有哪些优势?

       草甘膦的分析和测定用到的是GX液相色谱法，而钠离子、钾离子、异丙胺离子等阳离子分析和测定用到的是离子色谱法。具体来讲，离子色谱检测技术可同时检测草甘膦制剂中的钾盐、铵盐、钠盐、异丙胺盐，和铵盐和异丙胺盐等的复杂混合物。该方法简单快速重现性好，准确度和精密度均能达到对制剂定量分析的要求，能够作为除草剂中草甘膦盐的检测办法，适用于大量样品的定性及定量分析和测定。

       草甘膦水剂GB/T 20684-2017已经正式实施一年多的时间，取代旧国标GB/T 20684-2006。该标准适用于由草甘膦原药成盐后和水及适宜的助剂组成的草甘膦钠盐、钾盐、铵盐、二甲胺盐和异丙胺盐水剂。

       面临长期以来市面上草甘膦不同盐型混杂的现象，青岛普仁仪器专业研发的离子色谱仪能够实现对各种不同草甘膦产品的分析和测定。

草甘膦新国标的修正包括：草甘膦水剂和可溶粉(粒)剂。2017版草甘膦新国标较2006旧版国标版Z大的变更主要在草甘膦盐型方面进行了修正，很明确地增加了对特定草甘膦盐型成分的分析和测定，如下图所示：

常见草甘膦制剂样品谱图如下所示：

1.草甘膦钾盐样品谱图：

2.草甘膦异丙胺盐样品谱图：

普仁离子色谱仪用于某化工厂氯化钾样品的分析测定

案例：普仁离子色谱仪用于分析广东某化工厂氯化钾样品的纯度

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序号 保留时间 名称 浓度  峰面积

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1    3.149  CL 0.06805 50410

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总计 0.06805 50410

目前，氯化钾的纯度差异较大，检测氯化钾纯度的非常有必要。

市面上较为常见的是60%纯度的工业氯化钾，而食物级氯化钾要求纯度达到99%以上，这二者之间究竟有甚么差异?一般情况下，纯度低的氯化钾，含有的杂质过量，无法用于食品行业，由于有些杂志对人体有害。例如：工业镀锌里的氯化钾，一般都用60%纯度的氯化钾，假如用99%氯化钾能否满足要求呢?当然可以，只不过使用量有差异。但是，有些精致镀锌工艺，必需要用高纯度氯化钾，对其纯度的分析与检测非常有必要。在农业方面，60%浓度的也能够用于钾肥，但用于钾肥之前需要提纯这一步骤，这是因为低纯度氯化钾会含有对植物有害的成分，影响植物的生长发育。而高纯度氯化钾就不会有这类的情况发生。

因此，氯化钾的纯度不同，应用领域也相同。青岛普仁仪器专业研发离子色谱仪20余年，可用于化工行业各种阴阳离子浓度或纯度的检测。（来源：青岛普仁仪器有限公司）

草甘膦，又称农达，是一种广谱灭生性除草剂，广泛应用于茶园、果园、玉米田间等农业生产中。随着草甘膦的广泛使用，其在茶叶、水果、玉米等植物源食品中残留量的检测越来越受到国内外的关注。
草甘膦（GLY）及其代谢物氨甲基膦酸（AMPA）均为小分子化合物，具有极性强、易溶于水、难溶于各种有机溶剂等特性，这给常规检测带来了极大的困难和挑战。
中检维康使用CLOVER草甘膦专用柱（货号：GLY3000）对茶叶中的草甘膦及其代谢物进行处理，使用UPLC-MS/MS测定，当草甘膦及其代谢物加标浓度为80 μg/kg，其回收率在70-100 %，RSD在5 %以内，符合测定标准。

准确称取经粉碎的茶叶样品1.0 g(精确至0.001g)于50mL离心管中，加100 μL 浓度为10 mg/L的1,2-C13N15草甘膦同位素内标溶液，加入10 mL水，涡旋混合20 min，超声振荡10 min，以4000 r/min离心8 min。

移取5 mL上清液至15 mL离心管中，加5 mL二氯甲烷，涡旋5 min，以4000 r/min离心4 min，取上清液2.5 mL过CLOVER®草甘膦专用柱（CLOVER®草甘膦专用柱使用前应依次用3 mL甲醇，3 mL水活化），弃去前端几滴滤液，收集后续滤液。

取上述滤液1mL衍生，依次加入1.0 mL 50g/L硼酸钠溶液，0.5 mL 10 g/L FMOC-Cl，涡旋混合2 min，40 ℃水浴衍生1 h，涡旋1 min，再以8000 r/min离心3 min，上清液过0.22 μm滤膜，上机检测。

       草甘膦(Glyphosate，Gly)是广泛使用的一类广谱非选择性除草剂，其在环境和生物体中富集并通过食品进入人体，会对人体健康造成危害。随着其在茶叶上的广泛使用，草甘膦及其主要代谢产物氨甲基膦酸残留问题也越来越受关注。

　　目前常用的检测方法为离子交换净化、七氟丁醇(HFB)和三氟乙酸酐(TFAA)衍生后GC-MS检测，或9-芴基甲基三氯甲 烷衍生后LC-MS/MS检测，这些方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题，因此建立一种简便、快捷、有效的草甘膦及其代谢物残留的检测方法具有重要的意义。

       迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定茶叶中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的检测方法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取专用柱净化样品，收集流出液，Dikma  色谱柱分离检测，该方法特点：

1)     前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可；

2)     有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂；

3)     仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本；

4)     方法定量限0.1 mg/kg。

以下为详细解决方案，敬请参考！

茶叶中草甘膦及其代谢物的测定

——SPE-UPLC-MS/MS法

1、适用范围

        本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1mg/kg。

2、标准品配制

       单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。

       混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混标标 准中间液。

3、提取

       取1 g茶叶于50 mL离心管中，准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 mL上清液，待净化。

4、净化

       SPE柱： ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938)

       (1)活  化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；

       (2)上  样：将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。

注：同方法制备基质匹配标准溶液。

5、色谱条件

       UPLC-MS/MS条件：

       5.1 UPLC 条件

       色谱柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)

       流  速：0.2 mL/min   进样量：10 μL   柱  温：35 ℃

       流动相： A：乙腈   B：5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11

       梯度设置：

5.2 质谱条件

       定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果及色谱图

       茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果：

7、相关产品信息

       茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息：

草甘膦一直是存在争议的一种高效农药，而它引起的一系列问题随着使用量增加而暴露出来。不能否定草甘膦作为农药的优势，但是也不可否定近年来引发的各种问题。

对于草甘膦引起的问题应该不仅关注草甘膦本身的毒性大小，更应该将其毒性与环境等外在因素的影响结合起来。针对草甘膦的问题还需要进一步去研究，今后草甘膦研究也将成为研究领域的一个重点，让更多的人分享科研成果，尽量避免因科技研究对人类造成伤害。

普瑞邦光电衍生系统MDS检测项目：氨基甲酸酯类农药及残留、甘油磷酸酯类物质、黄曲霉毒素含量、氨基酸、牛磺酸、化妆品中游离甲醛、草甘膦除草剂、甲壳类和贝类毒素、伏马毒素含量等。根据不同需求客户产品分为以下几类，简约式MDS-2000，化学衍生和光衍生一体的MDS-3100，普瑞邦的化学衍生仪器MDS-3000。产品适用性方面，MDS可以搭配市面上主流液相设备，包括Waters、赛默飞、安捷伦和岛津等。

我们采用普瑞邦光电衍生系统MDS 3100多功能光电衍生系统配合液相及荧光检测器，依据 《GB/T 5750.9-2006 生活饮用水标准检验方法 农药指标》进行草甘膦检测实验，实验条件如下： 

• 色谱柱：阴离子交换树脂柱 250mm×4.6mm

• 衍生试剂：邻苯二甲醛、四硼酸钠、2-巯基乙醇、氢氧化钠、次氯酸钠（普瑞邦草甘膦衍生试剂包PriboFast®YS-GP-001）

• 阴离子交换流动相流速：0.5mL/min

• 柱后衍生氧化剂流速：0.5mL/min

• 衍生 OPA 溶液流速 ：0.3mL/min

• 衍生温度：室温

• 流动相：按照 GB/T 5750.9-2006 进行配制

根据标准配制 0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL 的标准系列溶液进行检测。

图2：0.05μg/mL标准品谱图

标准曲线线性较好，相对标准偏差较低，符合要求。

图3：标准曲线数据处理图

产品速递

普瑞邦提供多功能光电衍生系列产品，详情信息如下：