质粒提取的步骤

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  李子易y 2012-12-07 00:00:00

  1.挑取琼脂培养皿上的单个菌落，移至3-10mlLB培养液中，37℃150rpm培养过夜。 2.取1.5ml培养液移至Eppendorf管内，12000rpm离心1分钟，弃上清液。 3.将细菌沉淀悬浮于100μl溶液（GTE溶液）中，强烈振荡使之充分混匀。 4.加入200μl新鲜配置的溶液（NaOH/SDS溶液），盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合内容物，置冰上5-10分钟。 5.加入150μl溶液（5mol/L乙酸钠，pH5.2），轻轻颠倒数次，使溶液充分混匀，冰上放置3-5分钟。 6.10000rpm，4℃下离心10分钟，将上清液转移至另一离心管中。 7.加等体积的酚:氯仿，振荡混匀，10000rpm，4℃离心2min，将上清转移至另一离心管中。 8.加两倍体积无水乙醇沉淀双链DNA，充分混匀，室内放置2分钟 9.10000rpm，4℃下离心10分钟。 10.弃上清液，加1ml70％乙醇洗涤沉淀双链DNA，10000rmp，4℃下离心5分钟，倒尽乙醇，吸干管口残留乙醇。 11.加40μg/ml RNase的TE的缓冲液溶解DNA。

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  一明妈妈 2017-09-16 00:00:00

  实验一 ApaLI (178) P(BLA) ALPHA 质粒DNA的提取、 质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取 及琼脂糖凝胶电泳 ApaLI (2367) EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415) APr pUC19 BamHI (418) PstI (440)HindIII (448) P(LAC) ORI 2686 bp ApaLI (1121) 一 实验目的 掌握碱裂解法分离质粒DNA的基本原理和操作要点。 的基本原理和操作要点。 掌握碱裂解法分离质粒 的基本原理和操作要点 了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒 了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒DNA的试验方法 的试验方法 学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 的方法和技术 学习琼脂糖凝胶电泳检测 二 实验原理 质粒是一种染色体外能够稳定遗传的因子， 质粒是一种染色体外能够稳定遗传的因子，具有双链共价闭环结构的DNA分子。是染色体外小型（ 200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分 DNA分子。是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分 分子 DNAcccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。 ），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。 培养细菌使质粒扩增 三个基本步骤 收集和裂解细菌 分离和纯化质粒DNA 分离和纯化质粒DNA

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