收藏 | 病毒采样管灭活效果测试

根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》通知，“人群筛查应选择具有病毒灭活功能，如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表面活性剂的采样管。”

灭活型病毒采样管可高效灭活病毒，保护病毒核酸不被降解，且能在常温下保存较长时间，为样品保存及运输节省成本。选择灭活效果好的病毒采样管，有助于确保后续核酸检测质量。

本期实验，我们选取逗邦®一次性使用病毒采样管进行灭活效果测试，过程如下：

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实验材料

病毒采样管：

逗邦®一次性使用病毒采样管（灭活型）

实验材料：

慢病毒（吉凯基因，GCNL0319432），HEK293T细胞

核酸提取试剂盒和提取仪：

逗邦®（BNP027-2B, M32)

新冠荧光PCR试剂盒：

圣湘（N083-5X0001）

逗邦®一次性使用病毒采样管（灭活型）

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实验方法

参考《消毒技术规范》（2002版）病毒灭活试验中描述的检测方法，确定病毒保存管灭活能力。

步骤一：细胞培养

将生长状态良好的HEK293T细胞消化计数后稀释至1×104/mL，按照100μL/孔的体积，每个梯度的病毒做三个复孔，计算所需接种孔数，将细胞缓慢均匀接种至96孔板中。放入37℃，5%CO2培养箱中培养过夜。

步骤二：慢病毒稀释

将病毒滴度为107-108TU/mL的慢病毒按10倍梯度进行稀释，连续稀释3个梯度。

步骤三：病毒灭活

把稀释好的病毒置于室温条件下，与灭活款病毒保存液（批号：220201/220207/220211）按1:1体积比进行混合，置于室温下分别放置1min、5min和10 min进行灭活。

步骤四：终止灭活

采用病毒分离培养基（可用DMEM完全培养基替代）进行1000倍稀释以中和灭活保存液，终止灭活。

阴性对照：为病毒分离培养基对灭活款病毒保存液稀释1000倍的混合液；

阳性对照：为病毒分离培养基对病毒原液稀释1000倍的混合液。

步骤五：病毒孵育

将事先培养的HEK293T细胞中吸弃细胞培养基，每孔加入100μL准备好的病毒混合液，和对应的阳性对照、阴性对照。病毒孵育3小时，每隔30分钟从培养箱中取出晃动一次。

步骤六：细胞培养

孵育结束后，将病毒液吸去，每孔中加入100μL DMEM完全培养基，将96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养，并观察细胞状态。

步骤七：荧光细胞观察与计数

继续培养48-72h，期间观察细胞状态，若细胞培养液变黄，应换液，对荧光细胞个数适量的孔进行计数，计算病毒滴度。

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实验结果

图1：三批次灭活款病毒保存管在病毒灭活

不同时间后细胞生长情况

表1：三批次灭活款病毒保存管在病毒灭活

不同时间后病毒滴度情况

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实验结论

由图1和表1数据可以看出，慢病毒经灭活1min、5min和10min后感染HEK293T细胞后，在显微镜明场下细胞生长正常；三批次的灭活款病毒保存管与病毒作用5min后，可以有效灭活病毒。

尺寸说明：

包装方式：

产品特点

New

更高效节省

将采集自20人的20支拭子集合于1个病毒采样管中进行核酸检测，可节省采样管的损耗，同时减少实验室核酸检测量，提高检测效率。

更安全

病毒灭活型保存液，内含病毒灭活成分，高效灭活病毒，保障运输及检测人员的安全。

更稳定

保存液中含有RNase抑 制性成分，可保证核酸的完整，杜绝假阴性结果的出现。

更便利

采样后无需2~8℃保存运送，常温下保存48小时不影响核酸定量结果。

更高的采集率与释放率

搭配本公司植绒拭子，实现高效采样。

什么是核酸检测？

核酸检测是指通过特殊的技术手段检测临床样本中是否存在特定的病原体核酸，从而诊断患者的感染原因。新型肺炎核酸检测主要是看它的核酸，通过实时聚合酶链反应，即RT-PCR方法来检测。检测的样本鼻拭子或咽拭子从鼻腔或者口腔用棉签沾取样本再出来做一个检测，这是目前简单、快捷的一个方法。

核酸检测中病毒灭活样本保存液的优势是什么呢？

1.降低RNA降解造成假阴性

核酸样本保存条件苛刻，RNA极易裂解，4℃仅可存放24h，运输过程过长RNA就会出现提前被降解的现象，从而导致检测假阴性增多。病毒样本保存液是采样管内一种病毒样本保护性运输介质，防止病毒采样后不能及时检测在送检过程中病毒降解，避免因病毒在检测途中提前降解造成假阴性。

2.减小核酸提取过程的感染

所有人都知道新冠肺炎的传染性高，检测过程中稍有不慎会被感染。核酸检测需要有专门的仪器和标准的分子检测实验室，需要PCR认证人员操作，步骤繁琐，全程需要5~8个小时，过程中感染风险大。

病毒灭活样本保存液采用裂解盐可以快速对呼吸道病原体进行灭活、保存，使样品失去感染性。由于是灭活病毒而不用培养病毒，首先需要的就是对病毒进行裂解失活、破坏其膜蛋白释放核酸，大大降低了核酸提取过程中被感染的危险度。

德晟研发生产的病毒样本保存液分为病毒灭活样本保存液和非灭活型，非灭活型病毒样本保存液可以完整保护好病毒的蛋白，可用于细胞培养。针对不同的需求所适用的病毒样本保存液也会有所不同，有需求的可直接来电咨询。

近日，百泰克一次性使用病毒采样管以其优异的保存性能和极高的病毒检测灵敏度，通过了美国FDA 510K注册。

继获得欧盟CE认证，英国MHRA注册，加拿大MDEL，巴西认证，沙特认证，澳大利亚认证，加拿大认证，意大利认证，马来西亚认证，印度尼西亚认证等15个国家和地区认证之后，该产品又获得了美国FDA 510K这一国际权威认证。

一次性使用病毒采样管适用于临床新冠病毒、流感、禽流感、手足口病、麻疹等病毒样本的采集及转运保存，通常在人体的口腔、咽喉、鼻咽等部位采集样本。对拭子进行不同的处理，搭配上不同的运输介质，能构成不同类型样本的收集与运输组件，可应用在不同场景。

在整个采样组件中，保存液对于样本的保存效果是检验产品性能的重要指标，保存温度、时长都会成为影响保存效果的因素。

为了清晰地了解保存管的保存效果，我们测试了不同品牌的多种保存管，在室温保存、不同保存天数（第一天、第三天、第七天）条件下，新冠病毒的核酸检测灵敏度，结果如下：

1、室温保存7天后，灭活保存液（ITM）系列不同品牌保存管保存效果对比

2、室温保存7天后，VTM系列不同品牌保存管保存效果对比

3、室温保存7天后，UTM系列不同品牌保存管保存效果对比

　　甲流、呼吸道合胞病毒(RSV)对于大家的伤害很大，在抗击甲流、呼吸道合胞病毒(RSV)的过程中 对病毒的分离检测至关重要。

　　深圳美迪科生物一次性使用病毒采样管助力甲流、呼吸道合胞病毒(RSV)病毒分离!

　　深圳美迪科生物一次性使用病毒采样管自问世以来就广泛应用于新冠病毒、甲型乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、人鼻病毒、腺病、禽流感、手足口、麻疹、诺如、轮状等病毒标本以及支原体、脲原体、衣原体标本的采集及运送。

　　优势:

　　1、2ml、5ml、10ml、15ml、30ml等多种规格尺寸可选择，灭活型非灭活型保存液可选择，管盖颜色可定制

　　2、采用PP聚丙烯材质，密封性好，耐高温高压，低温不变脆;保存液能保持生物样本的完整性，防止气溶胶污染。

　　3、防漏设计，密封性好，材质稳固，管帽和管体均为优质的聚丙烯材质，管壁光滑，透明度高，螺纹密封，杜绝渗漏;

　　4、搭配一次性无菌采样拭子，采用辐照灭菌方式，无残留，使用更加安全放心

　　血清有必要做热灭活吗?

　　血清   实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是小黑点，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

　　在此，我们解析血清的质量标准：

　　1. 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。

　　2. 证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的yizhi物。

　　3. 有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。

　　4. 无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。

　　5. 对细胞有良好的支持繁殖作用。

　　6. 血清要通过滤膜过滤除菌，无菌。

　　血清有必要做热灭活吗?本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

CopanUTM®:用于收集、运输和保存病毒分子诊断测试的临床标本的通用运输介质

UTM®是一种FDA批准的收集和运输系统，适用于收集、运输、保存和长期冷冻保存含有病毒分子诊断检测的临床标本，包括COVID-19、衣原体、支原体或脲原体有机体。

运输介质装在一个塑料螺旋盖管中，在室温或冷藏温度下可维持生物活力48小时。

·室温，可靠

室温稳定的系统保持生物的生存能力长达48小时，不需要冷藏前收集

UTM®已经过测试和验证，完全符合CLSI M40-A2:微生物运输系统质量控制标准

*独特的培养基配方包括抗生素，以制细菌和真菌的生长，而不影响病毒，衣原体，支原体或脲原体

酚红pH指示剂提供了在整个存储和产品寿命中介质完整性的目视测量

方便的系统与多种配置

·可在单个运输管散装或作为患者收集包与棉签配对。取样棒轴上的模制断点，安全可靠地将取样棒断裂到运输管中

·裙边，平底管与独特的内部锥形形状，使样品容易离心，并允许管直立在实验室工作台。