大肠杆菌培养

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  游走的傀儡 2012-10-22 00:00:00

  现在可以买商品化的普通营养琼脂

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  来灵尐 2012-10-23 00:00:00

  LB培养基，Z容易生长的菌。

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  感性的只需把 2012-10-19 00:00:00

  大肠杆菌一般培养方法 使用牛肉膏蛋白胨培养基 组成成分：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，Nacl 5g，琼脂 15～20g，水1000mL，PH7.4～7.6。 具体配置步骤： 1.称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速. 2.加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，Z后补足所失的水分. 3. 调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围.若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度. 4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察.但是供一般使用的培养基，这步可省略. 5.分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染. 分装量:固体培养基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝. 6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状，大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞. 7.包扎 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中，则应以5支或7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好.然后用记号笔注明，培养基名称，组别，日期. 8.灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌，则应故人冰箱内暂存. 9.无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用. 大肠杆菌的培养： 37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。 菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致

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