PCR产物测序要求Z低的浓度是多少

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  heitiansh1 2017-01-15 00:00:00

  PCR产物测序要求Z低的浓度是多少 主要看的是PCR产物的量，已纯化一般要求总量500ng以上，未纯化1ug以上，这个量是一般情况，还要看你的产物长度，短的话可以少一些，长的话可能还要多送一些，供你参考。具体Z好咨询你要送测序的测序公司，这样即符合他们的要求就可以，同时也不会因为样品量的问题耽误你自己的实验进程。 　　纯化的pcr产物测序需要的要求： 　　(1)扩增产物必须特异性扩增，条带单一。如果扩增产物中存在非特异性扩增产物，一般难以得到好的测序结果； 　　(2）必须进行胶回收纯化； 　　(3）DNA纯度在1.6-2.0之间，浓度50ng/ul以上。 　　方法 　　(1) 在PCR反应液中加入3倍体积的Buffer PCR-A，若需加入的Buffer PCR-A不足100μl，则加入100μl。 　　(2) 将DNA-prep Tube置于2-ml Microfuge Tube中，将步骤⑴中的混合液移入DNA-prep Tube中，5500rpm离心1min。 　　(3) 弃滤液，将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，加入500μl Buffer W1，5500rpm离心1min。 　　(4) 弃滤液，将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube 中，加入700μl 已加无水乙醇的Buffer W2，5500rpm离心1min，以同样的方法再用700μl已加无水乙醇的BufferW2洗涤一次。 　　(5) 弃滤液，将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，14000rpm离心1min。 　　(6) 连滤液一并弃掉收集管，将DNA-prep Tube 置于一新的1.5ml 离心管中，在silica 膜ZY加入25-30μl Eluent或去离子水（65℃预热）。 (7) 室温静置2min，14000rpm离心1min洗脱DNA。 (8) 取5μl样品，1%琼脂糖凝胶电泳检测纯化结果。

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