lcms 如何看

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  szg51898 2016-05-09 17:37:36

  一、LCMS谱图的相关标准及MS棒图判断： a) LCMS合格谱图的标准： 1、UV谱图主峰的保留时间应大于2T0(进样峰时间)，并小于全部运行时间的4/5； 2、UV谱图的吸收波长以客户指定波长为准（一般为220nm），弱紫外样品（紫外吸收在220nm是波谷，MS信号相对较强）可用ELSD谱图交货或以客户要求为准； 3、UV谱图主峰吸收一般应高于100mau。 对信噪比良好的样品，可以适当降低峰高要求到高于50mau， 当所有可见的UV峰都积分后仍合格的，可认为合格； 4、UV谱图中，主峰理论塔板数在10000以上（即峰宽小于0.5分钟），峰对称因子应在0.9-1.2（即对称性较好）。 5、MS谱图应保证准分子离子峰可见，其它峰是二聚峰，以及合理的碎片或加合峰。 6、MS范围：通常在100-1000之间，对分子量很小或很大的样品，应调整MS范围，保证Z大值超过2M+23， Z小值小于M/2。 7、紫外积分超过2%的杂质，如果杂质的MS和主峰一致，需检查结构是否有异构体。如客户确认有异构体并同意可以合并纯度交货，方能判断合格，否则应重新分离或用其它手段如NMR确定结构。 8、紫外无积分或积分结果小于1%的色谱峰，在TIC中峰高不得超过主峰的1/2。（特殊情况除外：难电离样品；Agilent LCMS TIC中杂质吸收小于50000） b) MS棒图的判断（正离子检测）： 1、MS谱图中分子离子峰的值应为：EM+1（Exact Mass）(即[M+H]+) 2、常见的合理的加合离子有：[M+Na]、[M+K]、[2M+H]、[2M+Na]、[M/2+H] 3、加有缓冲溶液或溶剂的体系还可引进[M+X]+（X=溶剂或缓冲溶液中的阳离子）如：用碱性体系方法分析时常见的加合离子有：[M+NH4]+（我们的碱性体系用的 铵盐缓冲溶液）（用岛津仪器分析时常可见到的加合离子还有：[M+Na+X]+） 4、若有小于分子离子峰的碎片离子，要根据化合物结构来判断是否是其合理的碎 （出M1还是M1+2由断裂机理决定） 片，碎片M1所出碎片峰的MS值应为M1或M1+2 5、同位素效应：一般带Cl或Br的样品，棒图中同位素效应比较明显（见附图）； +++++ 6、若棒图中有不能解释的碎片或加合离子、且丰度较高，则需要进行NMR验证 c) MS棒图的判断（负离子检测）： 1、MS谱图中分子离子峰的值应为：EM-1（Exact Mass）(即[M-H]-) 2、加有缓冲溶液或溶剂的体系还可引进[M+X]-（X=溶剂或缓冲溶液中的阴离子） 3、其他常见合理加合离子及碎片离子同理正离子检测 二、LCMS分析方法的分类及其适用范围（反相色谱）： a) 从流动相体系划分，可分为：酸性方法和碱性方法 （方法确定的原理：先根据化合物的结构算出其ClogP的值来大致确定其适用的分析方法，若计算出的方法不合适，再根据其谱图的具体情况进行修改。） 一般来说：酸性方法适用于大部分化合物；常规样品通常用10-80AB，极性较小的样品可以考虑用30-90AB或50-100AB，极性较大的样品可以选择0-30AB或0-60AB 碱性方法适用的情况为： 1、极性很大，用酸性方法（0-30AB）时出峰仍太靠前； 2、用酸性方法时出峰形状很宽，对称性不好； 3、用酸性方法时目标物在进样峰的位置即被冲出，形成如下图所示的双峰； 4、有些物质在酸性体系易成盐、不稳定，也会形成如上图所示的情况 5、负离子检测一般在碱性体系中进行 b) 从质谱（MSD）的检测离子的极性划分，可分为：正离子方法和负离子方法 一般来说：正离子方法适用于大部分化合物；而羧酸、醛以及羧醛等结构的样品一般在正离子方法中电离不好，则需换用负离子方法来进行分析。 c) 从大气压电离质谱（API-MS）电离模式划分，可分为：（气动辅助）电喷雾（API-ES）、 大气压化学电离（APCI）、大气压光致电离（APPI） 一般来说：ESI源适合于大部分有极性的、含杂原子的化合物；如果样品在ESI源下电离很弱（紫外吸收相对较强），且分子量相对较小、具有一定的挥发性、是热稳定化合物，可以选择更换APCI源及APPI源来进行分析。

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