关于454焦磷酸测序的原理问题

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  CH68453622 2012-11-07 00:00:00

  一个一个回答吧。 1、每个磁珠携带的是同一个片段，经过乳液PCR过后，每个磁珠携带同一个片段的大量拷贝。但是LZ不要忘了，测序的时候是N多磁珠同时进行，不同的磁珠会携带不同的片段，不然怎么能称作高通量呢~ 2、高通量测序结束之后都会进行组装，这涉及到生物信息学，这里头的算法俺也不懂，但是肯定会重新组合，不然谁把DNA打断建文库就弄死谁··· 3、LZ的问题说到了454的缺陷：连续的同一个碱基怎么测序。这个是缺陷，只能通过荧光的强度来辨认，比如一个A和三个A的荧光强度就不同，不过这不好解决。 4、时间问题··额，这个LZ杞人忧天了，只能这么回答。

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  一只小鸟5711 2016-12-01 16:06:12

  1，对高通量测序来说，如果是测基因组相当于做鸟枪库测序，而不是针对特定位置来测得。 2，无法保证。所以实际上每次测一个基因组，其实要获得测至少6倍以上基因组大小的数据。通过过量的数据来拼接，Z后再把仍然没解决的gap用一代测序cover掉。 3，理论上，是这样。一个接一个的进入。 4，我忘记454是几色萤光了。应该是单色，还需加入洗涤同步的时间，要远大于4at。ngs快不是指并不是每个循环快，而是每次获得的信息量大。ngs每次跑的时间要数倍于一代测序，但是获得的信息量要千倍于一代测序。如果想要大量数据，自然是ngs快的多。说它价钱便宜也是同样道理。

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