简述PCR技术操作步骤

Rto曲终人散 2014-06-27 07:15:42 587 浏览

参与评论

登录后参与评论

全部评论(4条)

10bian05 2014-06-28 00:00:00

95℃解旋，55℃复性，72℃延伸

赞(2)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论
蜑泻秩3kp9 2014-06-28 00:00:00

解旋复性延长，大学内容

赞(12)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论
罃I估仓U 2014-06-28 00:00:00

如果你问的是操作步骤的话，需要先用电脑上的软件合成引物送到公司合成，等收到引物后，按体系大小和比例加入模板，mix，水。放进PCR仪里设置反应时间和循环数，P完拿出来跑个电泳就行了。

赞(16)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论
思忆在夜静灯昏 2017-04-05 00:00:00

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的Z大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1973 年，台湾科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。 PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶Z适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。 PCR的原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。耐热DNA聚合酶--Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。原料: DNA聚合酶链式反应技术简称PCR技术，是一种以模板DNA为基础，在引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下，利用DNA聚合酶的酶促反应，完成对模板的目的片段的快速扩增的过程，其依赖于3个温度的反复循环。每一循环的3个步骤为： (1)变性：即双链DNA在94℃条件下，通过热变性使模板的双链DNA氢键断裂而变成单链。 (2)复性：即当变性温度突然降至引物Tm值(通常为35～65℃)以下时，使引物与模板DNA互补序列杂交。由于引物一般由10～25个碱基序列，模板DNA结构远比引物分子复杂，且反应体系中引物分子的浓度又远大于模板DNA，故在退火温度时，引物与模板DNA容易结合形成互补链。 (3)延伸：在DNA聚合酶的作用下，以DNA为模板和以4种脱氧核糖核苷酸为原料，在Mg2+存在的条件下。DNA聚合酶依赖于其5'→3'的聚合酶活力，以引物结合于DNA模板链为起始点。使引物的序列得以延伸，合成模板DNA的互补链。

赞(20)

回复(0)

评论

评论
登录后参与评论

登录或新用户注册

微信登录
密码登录
短信登录

请用手机微信扫描下方二维码
快速登录或注册新账号

微信扫码，手机电脑联动

注册登录即表示同意《仪器网服务条款》和《隐私协议》

热门问答

简述PCR技术操作步骤:

简述离心泵的开/停操作步骤: 简述离心泵的开/停操作步骤？是简述`

用这个装置采取排水法收集氧气，简述操作步骤。

简述重结晶的一般步骤: 看清楚了，是简述，长的粘贴的不要

芯片洗干仪操作步骤

本文围绕芯片洗干仪的规范操作展开，核心在于通过标准化流程实现清洗与干燥的一致性、洁净度与良率的稳定。文章以可执行的步骤和关键工艺参数为线索，帮助操作人员建立可追溯的作业方案，避免因误操作导致污染或器件损伤。

在正式执行前需完成前期准备：检查设备状态、确认腔体与管路无泄漏，校准液位与温控传感器，核对清洗液的配比与有效期，确保工作环境符合无尘要求。

步骤一，预冲洗。以去离子水低速流动清洁芯片表面，去除大颗粒与污染物。步骤二，清洗循环，按工艺配方投放清洗液并维持规定温度、浓度与泵速，使表面充分润湿并去污。步骤三，再冲洗，采用高纯水完成尾冲，降低离子与残留物。步骤四，干燥，按腔体配置选择热风、真空或混合干燥，控制温度、时间与干燥介质，避免水滴再附着。

工艺参数与质量控制是核心。记录批次号、清洗温度、时间、液位、循环模式及干燥条件，完成后进行外观检查与残留检测，并保存参数数据以实现追溯与统计分析。

安全与维护方面，操作时佩戴防护用品，化学品存放在专用区域并确保通风良好；定期清洁滤网、密封圈和阀门，传感器需做自检以防漂移，发现异常应立即停机并报告。

通过上述规范化步骤，芯片洗干仪能够提供稳定的清洗与干燥效果，提升良率并降低返工风险。建议持续开展SOP培训、数据分析与现场审核，以确保工艺可重复、数据可追溯，建立以专业态度支撑的运维体系。本公司工艺团队将以数据驱动的过程控制为基础，致力于提供可控、可溯、可扩展的设备操作方案。

2025-09-23 19:00:21 62 0

天津本生详述PCR技术原理、实验步骤和应用

天津本生详述PCR技术原理、实验步骤和应用

　　实验目的

　　1.掌握聚合酶链式反应的原理。

　　2.掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。

　　二、实验原理

　　PCR技术，即聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)是由美PECetus公司的KaryMullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速获取大量单核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义，大地推动了生命科学的研究进展。它不仅是DNA分析zui常用的技术，而且在DNA重组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。

　　PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术，其结果都是以原来的DNA为模板产生新的互补DNA片段。细胞中DNA的复制是个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR是在试管中进行的DNA复制反应，基本原理与细胞内DNA复制相似，但反应体系相对较简单。

　　PCR由变性－－退火－－延伸三个基本反应步骤构成：

　　①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备;

　　②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

　　③引物的延伸：DNA模板－－引物结合物在Taq酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

　　重复循环变性－－退火－－延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

　　三、实验试剂与器材

　　模板DNA、2.5mmol/LdNTP

　　TaqDNA聚合酶(5U/μL)、SSR引物

　　10×buffer、15mmol/LMg2+、ddH2O

　　PCR仪、移液枪、PCR板

　　四、实验步骤

　　1、配制20μL反应体系，在PCR板中依次加入下列溶液：

　　模板DNA2μL

　　引物11μL

　　引物21μL

　　dNTP1.5μL

　　MgCl22μL

　　10×buffer2μL

　　ddH2O10μL

　　Taq酶0.5μL

　　2、设置PCR反应程序。

　　3、上样，启动反应程序。

　　4、扩增产物的电泳检测。

　　PCR技术原理、实验步骤和应用!先和大介绍到这，如果想要了解更多PCR的信息，可以关注天津本生生物，专业给生物医药客户提供生物实验室检测耗材，欢迎广大客户来询。

2021-07-06 10:20:15 709 0

简述反应釜通入蒸汽升温和冷却水降温的正确操作步骤:

简述更换损坏的电磁阀步骤:

简述电桥测量电阻的步骤。:

简述金相显微镜样品的制备步骤？:

亲和层析的操作步骤？: 谢谢~

SDS-PAGE的操作步骤:

全站仪的操作步骤？:

电子水准仪操作步骤:

色谱的操作步骤:

经纬仪的操作步骤:

MTT法操作步骤:

静脉注射的操作步骤:

注塑机的操作步骤:

手套箱的操作步骤:

2月突出贡献榜

推荐主页

简述PCR技术操作步骤

联系我们

关注我们