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阴离子层析纯化蛋白可以用含有edta的缓冲液吗

dqbzzk1964 2017-09-16 11:05:50 431  浏览
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  • 天天听音乐go 2017-09-17 00:00:00
    在蛋白质纯化中,除了离子交换层析之外,还有哪些常用的柱层析方法纯化蛋白质 离子交换层析是根据蛋白质所带电荷的差异进行分离纯化的一种方法.蛋白质的带电性是由蛋白质多肽中带电氨基酸决定的.由于蛋白质中氨基酸的电性又取决于介质中的pH,所以蛋白质的带电性也就依赖于介质的pH.当pH较低时,负电基团被中和,而正电基团就很多; 在pH较高时,蛋白质的电性与低pH时相反.当蛋白质所处的pH,使蛋白质的正负电荷相等,此时的pH称为等电点.离子交换层析所用的交换剂是经酯化、氧化等化学反应引入阳性或阴性离子基团制成的,可与带相反电荷的蛋白质进行交换吸附.带有阳离子基团的交换剂可置换吸附带负电荷的物质,称为阴离子交换剂,如DEAE-纤维素树脂;反之称为阳离子交换剂,如CM-纤维素树脂.不同的蛋白质有不同的等电点,在一定的条件下解离后所带的电荷种类和电荷量都不同,因而可与不同的离子交换剂以不同的亲和力相互交换吸附.当缓冲液中的离子基团与结合在离子交换剂上的蛋白质相竞争时,亲和力小的蛋白质分子首先被解吸附而洗脱,而亲和力大的蛋白质则后被解吸附和洗脱.因此,可通过增加缓冲液的离子强度和/或改变酸碱度,便可改变蛋白质的吸附状况,使不同亲和力的蛋白质得以分离.

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细胞裂解缓冲液的主要成分——TRIS-HCL、EDTA

裂解是指细胞分裂或破裂的一种状态,裂解缓冲液是一种有助于打开细胞的溶液,它可以在一些实验分析需要提取细胞内容物时进行使用,例如科学家在从细胞中提取DNA或蛋白质进行分析时就必须使用裂解缓冲液来辅助完成。细胞裂解缓冲液种类有很多,其中较常见的一种是TRIS—HCL缓冲液。

TRIS—HCL可以保持细胞裂解缓冲液的PH值zui佳状态,所以常用它作为裂解缓冲液的主要成分。裂解缓冲液有助于打开细胞,可以对细胞内的物质进行筛选,例如盐、清洁剂、螯合剂和抑zhi剂,以及一些碱性化学品。它不仅可以区分筛选甚至还可以去除这些物质。

裂解液除了生物缓冲剂之外,还包括一种螯合剂和抑zhi剂,例如乙二胺四乙酸(EDTA),因为这种化学物质与带有两个正电荷的金属离子(例如镁和钙)结合,可以使它们不能用于其他反应。许多 DNA 酶(咀嚼 DNA 的蛋白质)和蛋白酶(将其他蛋白质切碎的蛋白质)需要镁离子才能发挥作用,因此通过剥夺这些关键成分,EDTA 有助于降低蛋白酶或 DNA 酶的活性水平。

德晟为专业生产生物缓冲剂和EDTA的厂家,现在生产的生物缓冲剂类产品有TRIS、TRIS-HCL、 HEPES、 TAPS 、MOPS、 CAPS、 BICINE、 EPPS、 PEP等一系列生物缓冲液,目前成立已有十多年,拥有十分丰富的研发生产经验与产品知识,可为客户提供大量技术支持与售后保障。如有需要欢迎随时联系我们!


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缓冲液在蛋白中的组成

酶联免疫或化学发光免疫分析的对象包括有酶、蛋白、抗体、多肽、抗原、核酸、糖、脂质等物质,其中酶、蛋白、抗体或多肽均属于蛋白类分子,需要使用蛋白缓冲液来保护蛋白。

1. 生物缓冲液,包括有Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、PB磷酸缓冲液、CB碳酸缓冲液等,其中Tris的缓冲体系应用较为普遍,缓冲能力比较强,同时对蛋白有良好的溶解性,为蛋白提供合适的pH环境。

2. 盐类,主要是氯化钠,调节蛋白缓冲液的离子强度(类似盐浓度)。通常配制时,需较少的离子强度防止蛋白沉淀;但需要将蛋白脱离出来时,应增加离子强度,否则蛋白难以沉淀脱离完全。对于有些蛋白,两性离子的盐类有助于蛋白结合。

3. 表面活性剂:吐温20、Triton X-100等,改变缓冲溶液表面张力,增加试剂相容性。

4. 有时还需要添加糖类如蔗糖、海藻糖等,惰性蛋白如Casein(酪蛋白),防腐剂如叠氮钠、卡松(异噻唑啉酮混合物)等。

蛋白缓冲液选择优化

虽然蛋白缓冲液的基本组成类似,不过没有通用的缓冲液,不同的系统必须分别优化。不同的蛋白其合适的pH值、亲水性、溶解性、稳定性都有差异。另外,蛋白在缓冲液中越不稳定,蛋白结合力越强。当缓冲液pH与蛋白等电点相同时,蛋白最不稳定,容易聚集沉淀。

蛋白缓冲液的稳定作用

蛋白缓冲液中添加有糖,对包被蛋白的稳定性有重要作用,减缓蛋白老化作用,并增加亲水性;添加的表面活性剂也是增加蛋白的亲水性,惰性蛋白也具有保护作用。在蛋白结合包被步骤中,需用沉淀剂(醇)降低蛋白的稳定性,也可润湿膜,减少膜带有的静电。

这里的蛋白在缓冲液中的稳定与不稳定是特定的,改变缓冲液的部分条件以优化不同的蛋白处理步骤,前提都是不能使蛋白变性或失活。德晟是生物缓冲剂厂家,生产有Tris、Bicine、MOPS等多种缓冲剂。

 


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