DNA提取异丙醇需要灭菌吗

矮胖丑挫穷 2017-04-02 07:48:06 400 浏览

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幻雪夜57 2017-04-03 00:00:00

细菌DNA提取方案：革兰氏阴性菌，如E.coli，一般有三种可以选择的方法。一、水煮模板法——主要用于PCR反应 1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线，37摄氏度培养18－24小时。 2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中，混匀，100摄氏度煮沸10分钟。 3、12000转/分钟离心10分钟，取上清，－20摄氏度保存备用。操作Z简便，对试剂条件要求低。缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、蛋白等杂质。但是作为一般检测目的的PCR反应模板已经足够了。有人称扩增4kb以下片段都可用此种方法制取模版，编者用此类模板PCR可以扩增到3500bp的片段。建议：此法得到的模版保存时间短，强烈建议每月重新制作一次。二、CTAB/NaCl 法 1、接种一单菌落于5mlLB中，30℃培养过夜， 2、取1ml种子培养液接入100ml2%LB中，37℃、220r/min培养16小时; 3、5000r/min离心10分钟，弃去上清。 4、加入10mlTE离心洗涤后，用10mlTE溶解菌体，混匀，-20℃保存备用。 5、取3.5ml菌悬液，加入184μl10%SDS，混匀，加入37μl10mg/ml蛋白酶K，混匀，37℃温育1小时 6、加入740μl5mol/LNaCl，再加入512μlCTAB/NaCl，混匀，65℃温育10分钟。 7、加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，10000r/min离心5分钟，保留上清。 8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，混匀，10000r/min离心5分钟，保留上清。 9、加入0.6倍的异丙醇，混匀，10000r/min离心5分钟，收集DNA沉淀，用70%乙醇离心洗涤DNA沉淀。 10、用1mlTE溶解DNA，加入终浓度为20μg/mlRNaseA，4℃保存。 CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA加在第5步温育的时候，这样Z后没有RnaseA污染。每一步操作细致一些，得到的DNA可用于Southern blot。建议：长时间保存DNA可放于-20℃，但要尽量减少反复冻融，否则影响DNA质量。三、盐析法 ‍ 1、1.5ml对数期菌液 2、12000rpm 30 s 3、200ul裂解液（同CTAB/NaCl法），37c，1hr 4、66ul 5M NaCL，混匀充分，12000rpm 10min 5、上清用粗枪头取至新管 6、等体积酚充分混匀，12000rpm 3min，反复抽提至无蛋白层 7、取水层，等体积氯仿混匀，12000rpm 3min 8、上清至新管，2倍体积预冷无水乙醇 9、-20C，20min，14000rpm， 15min 10、400ul 70%冷乙醇洗涤 11、干燥，100ul 20ug/ml RNaseA，37C，30min 12、2倍体积无水乙醇沉淀，70%冷乙醇洗涤 13、干燥，溶于100ul TE 介于方法一和方法二之间，CTAB虽然取出糖分效果较好，但CTAB本身也是有毒的，所以此方法放弃了CTAB。革兰氏阳性菌，由于细胞壁的结构与阴性菌有差别，裂解比阴性菌稍微麻烦一些，可以采取CTAB/NaCl法稍加修改，在第四步加入终浓度2mg/ml的溶菌酶，37度温育1h。实验注意：提基因组Z好要将枪头尖剪掉（剪掉以后在酒精灯上迅速过一下，使其断口圆滑）。以免枪头损伤基因组！抽干时Z好是风干！

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DNA提取异丙醇需要灭菌吗:

dna提取te缓冲液需要高压蒸汽灭菌吗:

DNA提取中加入异丙醇为什么变色: 谁知道的请指点下啊！我也不知道是不是前面没提好

生化培养箱需要灭菌吗

生化培养箱在生命科学研究、药物开发以及细胞培养等领域扮演着至关重要的角色，其工作环境的干净与无菌程度直接关系到实验的准确性和重复性。许多用户在使用生化培养箱时会问：生化培养箱需要灭菌吗？这个问题的答案并非一概而论，而是需要结合设备的用途、培养内容以及实际操作规范进行科学判断。本文旨在探讨生化培养箱是否需要灭菌、灭菌的佳方式以及维护中的注意事项，以帮助相关人员理解其使用中的科学依据和操作要点。

生化培养箱的工作环境是否需要灭菌，主要取决于培养项目的具体要求。对于一些极其敏感、对污染极为敏感的实验，如细菌、病毒等微生物的培养，确保培养箱环境的无菌状态至关重要。这类实验通常要求在设备内进行彻底灭菌，以避免外界微生物侵入，影响实验结果。而对于一些细胞培养或非微生物类的生物样品，虽然维护干净环境仍是基本要求，但可能不需要每次都进行全面灭菌，而采用适当的消毒措施即可满足需求。

关于灭菌的方法，常用的包括高温高压灭菌（压力蒸汽灭菌）、干热灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。压力蒸汽灭菌因其高效性和安全性，被广泛应用于培养箱的消毒中。操作时，设备内部应达到121℃、波动压力15psi的灭菌条件，一般持续15至30分钟，确保每个角落都达到了灭菌要求。在进行设备灭菌前，应彻底清洗内部并移除所有易腐败或敏感材料，以避免二次污染。

设备的日常维护也十分重要。即使不进行全面灭菌，采取定期消毒措施也能减少微生物滋生的可能，比如用70%乙醇或专门的消毒液擦拭内部表面。保持培养箱门密封良好，避免外界空气的污染，及时更换过滤器，也是维护无菌环境不可或缺的一部分。

值得注意的是，在进行灭菌作业时，应遵循设备制造商提供的操作指南，避免因操作不当而损坏设备结构或引入潜在污染源。操作环境应保持清洁，防止灰尘、杂质进入设备内部。对于某些特殊的细胞或样品，可能还需要配合使用无菌手套、无菌工具以及采样袋等辅助措施确保无菌状态。

建立严格的清洁维护制度、监控环境微生物指标以及记录每次灭菌和维护情况，也是确保生化培养箱长效稳定运行的关键环节。通过科学合理的灭菌策略，不仅能够保障实验的准确性，还能延长设备的使用寿命，为科研与生产提供有力的技术支撑。

生化培养箱是否需要灭菌，取决于具体的实验需求。合理选择灭菌方式，结合日常维护管理措施，可以有效避免微生物污染，提高实验的可靠性和重复性。在实际操作中，遵循设备制造商的建议，结合实验室的标准操作程序，才能确保培养环境满足高的无菌要求，为科研创新奠定坚实基础。

2025-09-05 18:15:21 81 0

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高压灭菌器灭菌时间需要多长？: 简而言之：灭菌温度越低,需要的灭菌时间越长；灭菌温度越高,需要的灭菌时间越短
压力蒸汽灭菌的时间，要从灭菌器柜室内达到灭菌要求温度时算起，直至灭菌完成为止。

总时间包括：
1、 热力穿透时间
即从消毒柜内达到灭菌温度至消毒物品ZX部位亦达到灭菌温度所需时间。时间的长短取决于消毒物品的性质、包装的大小,放置位置和高压锅内空气排空程度和灭菌器的种类。
2、 消毒维持时间
即杀灭微生物所需的时间，一般用杀灭脂肪嗜热杆菌芽胞所需时间来表示。在115℃时需30分钟，121℃时需12分钟，132℃时需2分钟。
3、 安全时间
一般为维持时间的一半，其长短视消毒物品而定。对易导热的金属器材的灭菌，不需要安全时间。
下表提供的数据可供实际工作中参考。
注：
*包装体积 < 30×30×30cm3
**对于粘性液体，如琼脂培养基等，应延长时间5～10分钟。
1)    一般下排气式所需时间为：115℃需要30分钟、121℃需要15分钟、126℃需要10分钟
2)    115℃常用于制药工业上的灭菌。在微生物实验室内，有些含糖培养基亦用115℃30分钟灭菌，因为在更高温度下糖会分解。
3)    121℃～126℃常用于YL卫生和防疫工作中的灭菌。
以上所述知识灭菌时间的概数，1次灭菌中具体使用多少时间，需要根据物品的种类、包装的大小、安放情况和灭菌器的性能来确定。