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影响质粒DNA提取的因素有哪些

宝贝计划sunny 2017-11-21 21:40:35 768  浏览
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全部评论(1条)

  • go小飞454 2017-11-22 12:41:26
    这个要看是用试剂盒提还是手提。 试剂盒提取的话就很方便很好操作,试剂、吸附柱什么都是商品级的,问题都不大,主要是看你培养的菌质量如何,如果培养菌是挑取的是假阳性或者是培养基抗性出问题,就会因为质粒没有或者量过少而检测不出来,其次的话就是Buffer要加的是无水乙醇,不能加错,其他操作按说明书就没有问题。 手提的话需要质粒提取因素就很多了,这里有总结的很好的你可以看一下: 1、手提中主要是试剂对质粒DNA提取的影响较大,其中溶液Ⅰ,加入的葡萄糖可以使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子底部。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,可以YZDNase的活性和微生物生长。此步骤菌体一定要悬浮均匀,不能有结块,否则会降低抽提得率。 2、溶液II中,NaOH是Z佳的溶解细胞的试剂,不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞,碰到了碱后几乎在瞬间就会溶解,这是由于细胞膜发生了从bilaye(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化所导致。SDS也呈碱性,但如果只用SDS,达不到彻底溶解细胞的作用,加入SDS主要为下一步做铺垫。这一步操作要注意两点:diyi,时间不能过长,因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂;第二,必须温柔混合,不然基因组DNA也会断裂。 3、对于溶液Ⅲ,SDS在高盐浓度下发生沉淀,同时SDS能与蛋白质结合,平均两个氨基酸上结合一个SDS分子,所以沉淀也将溶液中的大部分蛋白质沉淀下来。溶液中的K+置换了SDS中的Na+而形成了不溶性的PDS,高浓度的盐使沉淀更完全。同时,由于基因组DNA很长,容易被PDS共沉淀。2M的醋酸可以中和NaOH,因为长时间的碱性条件会打断DNA。基因组DNA一旦发生断裂,小于100kb的片断,就不容易与PDS共沉淀。所以碱处理的时间要短,而且不得激烈振荡,否则Z后得到的质粒上会有大量的基因组DNA污染。这一步操作混合均匀后在冰上放置,可以使PDS沉淀更充分。

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(1)水分,水分是影响击穿电压最灵敏的赃物。因为水是一种极性分子,在电场力作用下,很容易被拉长,并沿着电场方向排列,从而在两极间形成导电“小桥”,使击穿电压剧降。另外,击穿电压的大小不仅取决于含水量,还取决于水在油中所处的状态,通常乳化水对击穿电压影响很大,溶解水次之。

(2)油中含有微量的气泡,也会使击穿电压电压明显下降,因为油中存在气泡,则在较低电压下气泡便可游离,并在电场力作用下,在电极间形成导电“小桥”,使油被击穿,降低了油的击穿电压。

(3)温度对击穿电压的影响视油中杂质和水分的有无而不同。不含杂质,并经干燥无水分的油,一般温度对击穿电压影响不大。但当温度升高到一定温度时,油分子本身因裂解而产生电离,且随着温度的升高,油品的粘度显著减小,电离产生的电子和离子由于阻力变小而运行速度加快,导致油品被击穿,击穿电压显著下降。

如果油中含有杂质和水分时,则在同一温度下,其击穿电压比无杂质。水分的油的击穿电压要低,温度较低时,油中水多呈悬浮状,其击穿电压值较小,随着温度的升高,乳状水逐渐变为溶解状,油品的击穿电压随之上升。但如果温度升高到一定程度,则油中水分发生蒸发,在油中造成气泡的数目便会增加,而且由于温度升高,粘度降低,使水分、杂质和气泡在油中形成导电“小桥”,使油的击穿电压又很快地下降。尤其是油中杂质和水分都存在时,这种导电“小桥”更易形成,击穿电压下降更明显。

(4)当油中既含有游离碳,又含有水分时,油的击穿电压随碳微粒量的增加而下降。

(5)油老化后生成的酸等产物,是使水保持乳化状态的不利因素,因而会使油的击穿电压下降;而干燥不含水分的油,酸等老化产物对击穿电压影响不明显,但确能使介质损耗因数急剧增加。这时,测定油的击穿电压不如测定介质损耗因数更能判断油的老化程度的原因所在。


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①仪器方面的因素:包括加热炉的形状和尺寸、坩锅大小、热电偶位置等。

②实验条件:升温速率、气氛等。

③试样的影响:试样用量、粒度等。

因此,在差热分析时应全面考虑各方面的影响因素和实验条件才能获得好的实验结果。

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