超声法破碎细胞提蛋白质的具体步骤

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  wbeautifulgilr 2012-09-13 00:00:00

  请问楼主，可否将得到的Z佳答案分享一下，在下也很需要了解。

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  三十83year 2011-05-17 00:00:00

  这样说吧，如果我们用原核表达载体表达一段目标基因，我们先把这个基因通过酶切连接的原核表达载体上，再转化到大肠杆菌中进行诱导表达，常用的诱导物是IPTG，37度诱导表达4小时，这样表达出的目标蛋白一般以包涵体的形式存在细菌内，然后用超声破碎细菌，首先将吸取5ml的细菌放入试管中，然后放在超声仪中，开80hz的频率进行破碎细菌，待到细菌全部破碎，溶液变清亮为止，然后你可以洗涤沉淀，进行包涵体蛋白的收集，后面你可以做一个SDS-PAGE蛋白质电泳和Western-blot，这样就可以确定你的要蛋白是不是你的蛋白。 Z后，你可以大量的摇菌提取蛋白质了，祝你好运，我也是做这方面的研究，已经做到蛋白质电泳这一步了，祝你好运。

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  6d32dbq60wp 2011-05-11 00:00:00

  1、清洗后的的组织用搅切机切碎成小块，混悬在至少两倍体积的缓冲液内；洗去培养液的细胞，混悬在至少两倍体积的缓冲液中； 2、将超声探头没入混悬液内，进行超声破碎。一般总超声时间约2min，分为几个周期，如4×30s，周期之间让样品在冰浴中冷却。 总的过程就是这样，不用加裂解液。

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