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- 倚世节能科技上海有限公司 2019-09-28 14:23:55
- <p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">工作原理:</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">流动相通过输液泵流经进样阀,与样品溶液混合,流经色谱柱,在色谱柱中进行吸附、分离,Z. 后每一组分分别经过检测器转变为电讯号,在色谱工作站上出现相应的样品峰。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">液相色谱的使用:</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">首先对样品进行预处理,然后进样,进样完毕后,清洗进样口,每次分析结束后,清洗通道,Z. 后关闭仪器。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">向左转|向右转</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">扩展资料:</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">液相色谱所用基本概念:保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论:塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致,但由于在气相色谱中以液体代替气相色谱中气体作为流动相,而液体和气体的性质不相同。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">此外,液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同,所以,液相色谱与气相色谱有一定的差别。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">主要有以下几力‘面:</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">①操作条件及应用范围不同</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">对于气相色谱,是加温操作。仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质,对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难,致使其应用受到一定程度的限制,据统计只有大约20%的机物能用气相色谱分析。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">而液相色谱是常温操作,不受样品挥发度和热稳定性的限制,它非常适合相对分子量较大,难汽化,不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物和高聚物的分离分析,大约占有机物的70%~80%。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">②液相色谱能完成难度较高的分离工作</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">a.气相色谱的流动相载气是色谱惰性的,基本不参与分配平衡过程,与样品分子无亲和作用,样品分子主要与固定相相互作用。而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子,为提高选择性增加了一个因素。也可选择不同比例的两种或两种以上的液体做流动相,增加分离的选择性。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">b.液相色谱固定相类型多,如离子交换色谱和排阻色谱等,作为分析时,选择余地大;而气相色谱并不可能。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">c.液相色谱通常在室温下操作,较低的温度,一般有利于色谱分离条件的选择。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">③由于液体的扩散性比气体的小105倍,因此,溶质在液相中的传质速率慢,柱外效应就显得特别重要;而在气相色谱中,由色谱柱外区域引起的扩张可以忽略不计。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">④液相色谱中,制备样品简单,回收样品也比较容易,而且回收是定量的,适合于大量制备,但液相色谱尚缺乏通用的检测器,一起比较复杂,价格昂贵。在实际应用中,这两种技术是相互补充的。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">综上所述,液相色谱具有柱效高,选择性高,灵敏性高,分析速度快,重复性好,应用范围广等优点,该法已成为现代分析技术的主要手段之一。目前在化学,化工,医药,生化,环保,农业等科学领域获得广泛的应用。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">GX液相色谱应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">(1)分离混合物</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">GX液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">通过与试样预处理技术相配合,GX液相色谱法所达到的高分辨率和高灵敏度,可分离并同时测定性质上十分相近的物质,能够分离复杂混合物中的微量成分。并且随着固定相的发展,还可在充分保持生化物质活性的条件下完成对其的分离。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">(2)生化分析</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">由于GX液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域,并已成为解决生化分析问题Z有前途的方法。</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">(3)仪器联用</span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22"><br/></span></p><p style=" font-family:'Microsoft YaHei';font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;"><span style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;" data-x-flag="14_22">GX液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。GX液相色谱一质谱联用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等:GX液相色谱一红外光谱联用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类等.使环境污染分析得到新的发展</span></p><p><br/></p>
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倚世节能科技上海有限公司:<p>奥。普。斯</p>
2019-09-28 14:25:19
热门问答
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本文聚焦液相色谱仪的工作原理、系统组成与制备要点,解读从样品进样到数据分析的全过程,并在实验室应用场景下给出可操作的要点与注意事项。
一、工作原理与系统结构 液相色谱仪通过在固定相与流动相之间建立差异化的分配系数,使混合物中的组分在柱内以不同速度移动,从而实现分离。核心系统包括高压泵、进样器、色谱柱、检测器以及数据处理单元,形成从样品注入到检测信号输出的闭环。对比HPLC与UPLC,差别主要体现在柱径、粒度及工作压力上,影响分离效率与分析时间。
二、制备要点
- 流动相准备与去气:选择与方法匹配的溶剂,按梯度或等度流动相配比,使用去气装置和超声去泡,确保基线稳定。
- 系统初始化与空跑:检查管路连接、密封件磨损,进行空跑基线,确保泵压稳定、回流与泄漏无异常。
- 柱温与方法设置:设定柱温,确保温控均匀;在梯度方法中验证梯度准确性,避免温度波动影响分离。
- 样品前处理与进样:样品需充分溶解、过滤,避免微粒堵塞针阀,按需求设定进样体积,减少体积误差。
- 方法开发与校准:选择固定相、流动相、检测波长,建立标准曲线,评估线性范围、检出限和定量下限,确保方法的可重复性。
- 日常维护与清洁:定期更换滤器和柱塞密封,清洁溶剂瓶,监控基线与噪声,避免污染源进入系统。
- 安全与合规:遵守实验室化学品安全规范,规范废液处理、标签与记录。
三、常见问题与解决思路 基线波动多来自溶剂污染、柱污染或气泡;峰形 asymmetric 可能因柱龄、样品量或进样口污染;压力异常通常源于泵密封件磨损或管路堵塞;灵敏度下降与检测器污染、流动相纯度有关;重复性差多与样品前处理不一致或柱温不稳相关。针对性地排查溶剂、管路和柱状态,通常能快速定位并改善。
四、选择与优化建议 在应用前明确目标分离度、检测灵敏度和分析时间,确保流动相与柱的匹配;优先选择高纯度溶剂、稳定的基线与易维护的系统配置,结合定期维护制定长期运行计划。
通过上述要点可以对制备液相色谱仪的工作原理、关键部件和实际制备步骤有清晰认识,提升实验室分析的稳定性与数据可靠性。
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- 制备液相色谱仪原理是什么
本文聚焦制备液相色谱仪的原理和关键制备要点,揭示如何通过系统理解分离机理、仪器组成与参数控制来实现稳定、可重复的分析结果。液相色谱的核心在于样品在移动相与固定相之间的分配和相互作用差异,这决定了分离度、峰形与定量的准确性。通过合理设计流动相、选择合适色谱柱、并优化柱温与检测方式,可以在复杂样品中获得清晰、可追溯的分析结果。
原理框架与分离机制 液相色谱的分离原理主要依赖分配系数、相互作用强弱与柱效应的综合结果。固定相的化学性质(如极性、疏水性、离子交换能力)决定样品组分在柱内的停留时间,移动相的组成与流速则拉动整个分配平衡。梯度或等度洗脱条件下,样品组分在不同时间点达到饱和分配,从而产生可分离的峰序列。温度也通过改变黏度与分配系数影响分离效率,因此在方法开发阶段需进行温控与参数评估。
组成与工作流程 液相色谱仪的核心由进样系统、输运(泵)、色谱柱、柱温控温、检测器以及数据处理单元组成。进样系统确保样品以稳定、小化波动的流量进入系统;泵提供稳定的流动相压力与流速,支持等度或梯度洗脱;色谱柱承载固定相并实现分离;柱温控制则调整分配系数与峰形;检测器将分离后的组分信号转换为可分析数据。整个流程的关键在于各模块的耦合稳定性,以及系统自我排空、预处理和日常维护的执行。
制备要点与参数优化
- 流动相制备:确保高纯度溶剂、适当缓冲体系及pH稳定性,避免微量杂质影响峰形与保留时间。
- 色谱柱选择:根据目标分离的化学性质选择合适固定相,注意粒径、孔径及耐压范围对分辨率的影响。
- 系统组装与排空:新系统需进行多轮排空、气泡排出与等压稳定,防止柱效下降与检测噪声增加。
- 参数设定:优化流速、梯度剖面、柱温与检测波长,使目标组分峰形尖锐、重现性高,定量线性范围覆盖分析要求。
- 维护与稳定性:定期用标准物质进行方法再现性考核,记录基线噪声、保留时间的波动并进行故障排查。
检测与数据处理 常用检测模式包括紫外/可见、荧光、质谱等,需匹配目标化合物的吸收特性或质谱特征。数据处理侧重基线校正、峰积分、内部标准比对以及方法学评估(线性范围、灵敏度、检出限、定量限)。在高通量分析中,自动化峰识别与数据归档能显著提升工作效率与可追溯性。
应用场景与方法开发 液相色谱广泛应用于药物分析、食品安全、环境监测及生物样品研究。方法开发通常从选择柱和流动相开始,逐步建立分离条件、评估鲁棒性并进行抗干扰性测试。通过系统地优化分离度、峰容量和检测稳定性,可以建立可转移至实际批次分析的稳定方法。
结语 理解液相色谱仪的原理、选型与调试,是实现高分辨率、可重复分析的关键所在。通过科学的制备与严谨的方法开发,可以在复杂样品环境中获得可靠的定量结果与可追溯的分析数据。
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