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简述血球计数板的结构和计数原理?

爱你雅微 2017-04-17 12:57:05 1878  浏览
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  • 进pls自我 2017-04-18 00:00:00
     血球计数板(改良牛鲍计数板)   用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱,   将特制的专用盖玻片覆盖其上,形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格,分   为9个大方格,每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm(ul),其中,ZY大方格用双线双成25个中   方格,位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域,用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格   是白细胞计数区域,用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局(NBS)规定,大方格每边长度允   许误差为±1%。 [编辑本段]红细胞计数公式  红细胞数/L=N*25/5*10*10^6*200   N为:五个中方格的RBC总数   N*25/5为:ZY大方格RBC总数(即:0.1mm(ul)的RBC总数)   N*25/5*10为:1mm(ul)RBC总数   N*25/5*10*10^6为:1L的RBC总数   *200为血液的稀释倍数   公式简化后:红细胞数/L=N/100*10^12 [编辑本段]测微尺的构造和使用方法  测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺.目镜测微尺用来测量视野中的物体长度;物镜测微尺是标准长度,用来标定目镜测微尺.   (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片,其ZY刻有精确的刻度,通常是将5mm划分为50格,实际每格等于100μm.刻度的大小随着使用的目镜和物镜的放大倍数而改变,用前必须用物镜测微尺来标定.   (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载玻片,其ZY有一小圆圈.圆圈内刻有分度,将长1mm的直线等分为100小格,每小格等于10μm. [编辑本段]目镜测微尺的标定  (1)取下目镜,旋下目镜上的透镜,将目镜测微尺放人目镜的中隔板上,使有刻度的一面朝下,再旋上透镜,并装入镜筒内.   (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上,使有刻度的一面朝上,同观察标本一样,使具有刻度的小圆圈位于视野ZY.   (3)先用低倍镜观察,对准焦距,待看清物镜测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行,并使两尺的左边diyi条线相重合,再向右寻找两尺的另外一条重合线.(4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数. [编辑本段]计算方式  (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数   (2)以同样方法,分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度.   (3)如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数.若更换物镜,目镜的放大倍数时,必须再进行校正标定. [编辑本段]血球计数板的构造和使用  血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.   计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图. [编辑本段]血球计数板的使用  以计数酵母菌为例   (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.   (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.   (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在ZY的计数室上加盖专用的厚玻片.   (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.   (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数ZY的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.   (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).   (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.   3.计算公式   (1)16格×25格的血球计数板计算公式:   酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数   (2)25格x16格的血球计数板计算公式:   酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数   4.血球计数板的清洁   血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.

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拥有这台仪器,告别被血球计数板支配的恐惧

你知道吗?

       从18世纪血球计数板首次被应用于分析病人血液样本以来,逐渐发展为实验室细胞计数的标准工具。


       但是由于其本身固有设计的简易性和使用过程的复杂性,导致其计数结果会有一个必然的误差。其误差主要来源于人为操作因素:


细胞悬液的混匀

       均匀细胞悬液的准备对计数结果的准确性至关重要。对于某些极易聚团或未能均匀打散的细胞悬液,人工计数时,往往不易识别。


细胞悬液的稀释

       依据大多数实验室的习惯,通常会采取对四个顶角的大格内的细胞进行统计计数,每个大格的细胞一般落在30-50个之间时,计数结果会更加准确。这就意味着,细胞悬液过浓或者是过稀都不利于获得准确的结果。多数情况下,我们需要对悬液进行有效的稀释。


盖玻片的摆放

       据一项研究表明,在计数过程中,盖玻片的位置不准确可造成7.6%的计数差异。


人工计数过程的误差

       一项实验表明,不同操作者之间的计数差异能高达52%,而同一个操作者的计数差异为20%。在计数过程中,往往需要同一个人在相同的条件下进行多次计数以消除误差。(即使这样,也可能会产生20%的误差)


人为计算过程的误差

       通过计数板获取的数据结果,需要通过一系列的计算,从而转化成实际的细胞浓度数据。再乘以细胞原液的稀释倍数(如台盼蓝的稀释等),方能得到所需样品的细胞浓度。计算过程中的误差也会影响到Z终的实验结果。


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2013-01-17 02:41:33 419 3
浮游生物计数板怎么计数

浮游生物计数板怎么计数

浮游生物是水体生态系统中的重要组成部分,其数量和种类的变化直接反映了水质的好坏。浮游生物计数是环境监测、生态研究、渔业资源评估等领域中的基础工作。而浮游生物计数板作为计数浮游生物的重要工具,其使用方法和计数技巧对于确保数据准确性至关重要。本文将详细介绍浮游生物计数板的计数方法,帮助相关研究人员和技术人员掌握其正确使用技巧,进而提高浮游生物计数的效率与精度。

浮游生物计数板的基本原理

浮游生物计数板通常由透明的平面玻璃板组成,表面有均匀的网格状刻线,每个网格单元用于容纳一定数量的浮游生物样本。其基本原理是通过将水样滴入计数板的格网内,然后在显微镜下观察每个网格内的浮游生物,从而对浮游生物的密度和种类进行计数。

计数方法

  1. 水样的准备 在使用浮游生物计数板之前,首先需要准备适量的水样。水样的取样方法通常要求在水体的不同位置和深度进行采集,以确保样本的代表性。水样应该经过均匀搅拌,防止浮游生物的沉积或分层。

  2. 水样的分配 将准备好的水样小心地滴入计数板的网格区域。根据计数板的规格,通常可以滴入适量的水样,以便填充整个网格。需要注意的是,水样的量应适中,过多或过少都会影响计数的准确性。

  3. 显微镜观察 将计数板置于显微镜下,调整焦距,确保能够清晰观察到每个网格内的浮游生物。在观察过程中,使用专业的计数方法,按照网格进行分区计数,确保每个网格内的浮游生物都被准确记录。

  4. 计数技巧 计数时应注意不要重复计数同一只浮游生物。通常采用“回溯计数法”,即从显微镜下看到的浮游生物按一定顺序记录,并在完成一个网格的计数后,迅速进行下一个网格的观察,以防混淆。根据浮游生物的大小和形态,可能需要通过调整显微镜的放大倍数来提高计数的精确度。

  5. 数据计算与分析 在完成计数后,根据计数板的格网面积和观察的总水样量,计算出浮游生物的密度,进而进行相关的生态分析。不同种类的浮游生物在生态环境中的意义不同,因此需要结合浮游生物的种类进行详细分类分析。

注意事项

  • 显微镜的调整:在计数过程中,显微镜的清晰度和焦距调整非常重要,必须确保观察到的浮游生物清晰可辨。
  • 计数时的标准化:为了确保计数的一致性,计数人员应该遵循统一的操作规范,避免因操作差异导致的数据偏差。
  • 反复检查:由于浮游生物的形态多样且体积较小,计数时容易产生漏计或重复计数的情况。建议在完成计数后进行复核,以确保数据的准确性。

结语

浮游生物计数板是一种精确的浮游生物计数工具,其操作的规范性和计数技巧直接影响实验结果的可靠性。掌握浮游生物计数的标准方法,并结合实际操作经验,不仅有助于提高浮游生物计数的效率,也为水体生态环境监测和研究提供了重要的数据支持。

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