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荧光探针在溶剂中的溶解性能够影响波长吗

黯耀*騎士 2017-04-17 23:46:29 627  浏览
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全部评论(1条)

  • 惟惜恋鬼飘飘 2017-04-18 00:00:00
    荧光探针在溶剂中的溶解性能够影响波长 溶剂在紫外光区有吸收,截止波长:就是溶剂吸光度为1 AU时的波长,紫外检测器分析时的波长要在截止波长之上。当小于截止波长的辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生强烈吸收,它严重干扰组分的吸收测量。 溶剂会影响吸收光谱的强度和溶剂分子光谱的精细结构。 一般说来,溶剂的极性增大会使溶质的精细结构清晰度减弱,甚至完全消失而呈现一个宽峰。所以,在溶解度容许范围内,应选择使用极性较小的溶剂。 另外,溶剂本身也有自己的吸收光谱,该光谱如果与溶质的吸收光谱有重叠,就会影响对溶质吸收带的观察。 因此,紫外吸收光谱分析中常用的溶剂都有一个波长限度,低于此限度时溶剂的吸收必须加以考虑。

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       每个实验室的色谱分析工作者都很清楚,HPLC 分析使用液体作为载体,它将注入的样品溶液输送到色谱柱然后输送到检测器。这种载体可以是缓冲液与有机溶剂的水-有机混合物、有机-有机混合物。HPLC 系统的管道和阀门通道非常狭窄,使用未经适当过滤的溶液可能会导致堵塞。通过液相色谱仪运行清洁、无颗粒的 HPLC 级溶剂是一项基本维护方案。

 

一、对HPLC 系统的影响:

       使用过滤流动相以去除颗粒物质能够防止导致色谱柱堵塞,色谱柱不仅很昂贵而且被颗粒物堵塞会导致背压增加或保留时间发生变化;还能大限度地减少由于 LCMS、UPLC 和 HPLC 等灵敏度高的仪器设备中的精密阀门和管路堵塞而导致的系统停机时间。高级色谱溶剂/超纯水通常通过 0.2 微米过滤器进行预过滤,以满足其在色谱系统中使用的等级。但是,有时您也使用这些溶剂(含或不含化学试剂和添加剂)制备(混合)自己的流动相。当您使用这些试剂级化学品或添加剂制备流动相时,还应该在使用前通过 0.2 微米玻璃或钢过滤器过滤混合物,这可以确保您的流动相储液瓶在使用过程中是没有污垢和灰尘等杂质。

 

 

二、溶剂过滤器的重要性:

       过滤和过滤器(又称溶剂吸滤头、流动相吸滤头等)在 LC 系统中是非常重要的,因为流动相流路中如果存在微粒,LC 系统中的许多组件都容易过早失效。例如,从溶剂瓶中抽出的流动相中的灰尘或其他微粒会导致泵止回阀部分失效或完全失效(泵根本不产生流量)。所以在选择流动相溶剂进行任何分析之前检查流动相溶剂的完全混溶性很重要,同样重要的是检查它们在混合时不会相互反应。否则悬浮颗粒物会导致柱内积聚并产生背压,从而影响流速和损坏泵的组件。最坏的情况还可以是接头处可能会出现流动相泄漏并伴随着分析运行停止的情况发生。还有最明显的故障模式涉及进样样品或仪器组件中的微粒积聚在色谱柱入口处,从而导致色谱柱堵塞。

 

三、选择溶剂过滤器的选择:

       选择合适的过滤器需要了解过滤器/溶剂相容性以及过滤器的化学/物理特性。这些特性包括孔径、孔分布、过滤器厚度、可提取物、疏水/亲水特性、结合特性、热原性、气体和液体流速、爆破强度、高压灭菌性、孔径和标称颗粒保留。选择不正确的过滤器可能会导致可提取材料危及分析结果。对于色谱分析,可萃取材料产生的情况包括样品吸收、共流出和外来峰。在液相色谱的应用中通常选择孔径为 0.45μm的在线过滤器,而对于细菌去除或超高液相色谱应用中则适宜选择 0.2μm 的在线过滤器。

       今天恒谱生分享的知识先到这啦,希望对您的工作有所帮助!


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         样品在注入液相系统前,必须选择一种合适的HPLC溶剂。在反相GX液相色谱中,当样品溶剂与流动相的洗脱强度有差异,尤其是前者的洗脱强度较强时,就会产生峰的变形及柱效的降低。解决该问题最有效的方法是使用流动相作为溶剂溶解样品,这样既可以避免样品溶剂和流动相之间任何强度或粘度的不匹配,也可以减少样品分析时基线的漂移。溶剂在流动相中起着重要的作用,并有助于将进样品通过分离柱后输送到检测器。为了满足不同的分析要求,可以购买不同纯度等级的溶剂来使用,HPLC分析需要使用高纯度的溶剂,但是同时也要考虑成本和实用性等方面。

 

         HPLC级溶剂的纯度通常超过99.9%,并且瓶身标签上还会标明其他杂质的含量。但是杂质会导致多余的峰,从而干扰色谱图中的主峰,对我们的分析结果产生干扰。杂质产生的原因有很多,可能溶剂纯度不够,可能是瓶身不干净或者软管不干净,还可能是溶剂吸滤头的过滤杂质效果不好。恒谱生不锈钢流动相进样口过滤器能安全有效地保护泵和止回阀,尺寸小,适用于各种品牌的HPLC系统和多种小瓶口的存储池容器。吸滤阻力较小,几乎没有背压和形成空化,兼容多种流动相管路,无需换吸滤头即可配不同规格的吸管,过滤微粒污染物效果好,无气泡,溶剂利用率高。

 

        在整个紫外线可见波长范围内,没有溶剂是100%透明的,常用的HPLC溶剂在一定波长范围内显示出透明性。大多数应用中会使用紫外线检测器,因此所选的溶剂应该尽可能具有低的紫外线截止波长,让大多数的样品组分在高于截止值的波长处显示出可测量的吸收度。除此之外,溶剂的粘度越高,填充柱中固定相的阻力将导致背压越高,因此所选溶剂也应具有低粘度才是比较理想的。

        大多数的溶剂在密封瓶中才能维持它的稳定性,但某些溶剂的保存期限有限。使用时要注意查看使用期,注意在有效期内使用,不要购买过多的溶剂避免ZH用不完产生了浪费行为。

      作为ZH的建议,所有溶剂在使用前通过进样口过滤器过滤并脱气,这样的预防措施将提高HPLC系统的使用寿命,也有助于增加分析结果的可靠性。


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