检测挥发性有机酸FOS和总无机碳TAC实验

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• 检测挥发性有机酸FOS和总无机碳TAC实验

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  主要用途细胞总抗氧化能力（TAC）荧光法（ORAC）定量检测试剂是一种旨在通过使用荧光素探针，受到有机氮自由基AAPH的破坏，但在抗氧化剂的存在下，得到YZ，由此通过荧光分光光度仪，观察其峰值下降程度的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于适用于各种新鲜细胞样品总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）次氯*（hypochlorousacid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血*、还原性谷胱甘肽和尿*胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过氧自由基吸光能力（oxygenradicalabsorbancecapacity；ORAC），即使用荧光素（fluorescein）作为探针，2,2'-偶氮*异丁基脒****（2,2-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride；AAPH）作为过氧自由基供体（peroxylradicaldonor），其攻击探针，产生荧光淬灭，一旦受到抗氧化剂作用，而防止荧光消失，由此评价抗氧化潜力和活性，也就是自由基去除作用（freeradicalscavenging），在荧光分光光度仪（激发波长485nm±20，散发波长528nm±20）的帮助下，观察其峰值下降程度的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。[详细]

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  主要用途食物总抗氧化能力（TAC）比色法(DPPH)定量检测试剂是一种旨在通过有机氮自由基染料DPPH的参与，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜组织（动物、人体、昆虫等）的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）次氯酸（hypochlorousacid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过稳定的有机氮自由基染料1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-Dipheny1-2-picrylhydrazylradical；DPPH），受到抗氧化剂的去自由基作用，呈现深紫色转化为黄色的变化，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪(515nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备50毫升烧杯：用于样品操作的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器4℃台式离心机：用于样品操作96孔板：用于比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤样品准备1、固态食品处理1．秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯，杯口封口膜密封2．加入8毫升清理液（ReagentA）3．搅拌30分钟，充分混匀4．继续加入清理液（ReagentA）到终容量为10毫升5．过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒6．封口膜封口备用2、液态食品处理1．移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管2．放进台式离心机离心10分钟，速度为1500g3．移取上清液到新的15毫升锥形离心管4．（选择步骤）可以加入适量的清理液（ReagentA）5．（选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈）6．置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存标准液准备1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管2．移取50微升标准液（ReagentD）到1号管3．小心移取10微升缓冲液（ReagentB）和40微升标准液（ReagentD）到2号管，混匀4．小心移取20微升缓冲液（ReagentB）和30微升标准液（ReagentD）到3号管，混匀5．小心移取30微升缓冲液（ReagentB）和20微升标准液（ReagentD）到4号管，混匀6．小心移取50微升缓冲液（ReagentB）到5号管7．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号缓冲液（ReagentB）标准液（ReagentD）测定体系标准Trolox浓度10微升50微升300微摩尔/升210微升40微升240微摩尔/升320微升30微升180微摩尔/升430微升20微升120微摩尔/升550微升0微升0三、样品测读实验开始前，将－20冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，移取5毫升染色液B（ReagentC2）到1瓶染色液A（ReagentC1）里，混匀，置于暗室里，标记为染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。1．准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔2．分别移取205微升缓冲液（ReagentB）到96孔板里的每个孔里3．分别加入25微升染色工作液4．加入20微升缓冲液（ReagentB）到空白对照孔5．加入20微升上述配制的标准液（ReagentD）到相应标准对照孔里6．加入20微升组织裂解样品（100微克食品总量）到样品孔里7．轻轻摇动96孔板，使其混匀8．室温下孵育15分钟9．即刻放进酶标仪里测读：515nm波长10．分析结果：1）构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓度（微摩尔/升）2）空白对照孔为Zda吸光单位（OD515nm）读数3）标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD515nm）读数4）根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）5）计算样品实际总抗氧化能力【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）×0.25(体系容量；毫升）×样品稀释倍数】÷0.02(样品容量；毫升）=（微摩尔/升TROLOX等值）6）根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际YZ百分率）【（空白对照孔吸光单位读数-实际吸光单位读数）÷空白对照孔吸光单位读数】×1**%7）IC50：50％YZ率所需的样品单位：TROLOX等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微升）×（所需样品单位）=（已知样品单位÷试剂YZ百分率）×50%[详细]

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  2015-09-14 00:00

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