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用什么方法进行抗原修复?
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本文由 上海盈公生物技术有限公司 整理汇编
2018-09-27 10:00 527阅读次数
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为什么要进行抗原修复?组织在制作过程中,由于化学试剂的作用封闭了抗原,又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲,致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来,为了解决上述的问题,利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。在免疫组化染色后的镜下观察中,有发现这样的结果,阳性物反应不强,时隐时现,表达不均匀,有时可出现假阴性,这是因为:1.组织在用甲醛固定的过程中所形成的醛键可封闭抗原的决定族。甲醛与组织蛋白质类的反应是多样而复杂的,因为它能和多种不同的功能基团结合,在多数情况下在其间形成桥键8。这也是甲醛的一个作用,因为它是一种聚合固定剂,因而能在相邻的蛋白质键间形成桥键的作用。2.甲醛在保存进程中会形成羟甲基,也可封闭抗原决定族。据French和Edsall的研究认为,Z常遇到的甲醇反应,就是加到一个含反应性氢原子的化合物中,形成一个羟甲基化合物。3.在组织固定过程中,甲醛与蛋白质发生交联,形成醛交联蛋白,这种化合物封闭了抗原,使之无法表达出来。为了解决上述存在的问题,更好地暴露出抗原,将其很好地显示出来,目前世界上公认的方法就是必须进行抗原修复。用什么方法进行抗原修复?至今为止,抗原修复有许多种方法,在这些方法中,有的是根据抗体的要求来进行,有的是根据抗原的表达程度来进行,我们则对每种病例每项检测,都要求必须进行抗原修复,以达到抗原全面表达的**状态。物理化学试剂抗原修复法:1.真空负压抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇真空负压处理5分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),真空负压干燥箱预先调至95℃,真空负压处理10分钟。⑤待修复注降至室温的一,PBS洗3次,随后按选好的免疫组化染色方法进行染色。2.微波辐射抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),于微波炉内微波辐射10分钟,如检测Er和Pr则需要20辐射分钟左右。⑤待修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学的染色方法进行染色。3.高压抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④切片放入抗原修复液中,边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1-4分钟。⑤待修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。4.隔水热抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH0.6)中,边同容器一起放入水溶锅中加热,其间应不断用温度计测其温度,待抗原修复液的温度达到有效温度后(92℃↑)。即开始计时,持续40分钟。⑤待抗原修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选定好的免疫组化染色方法进行染色。5.电炉加热抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④将切片放入抗原修复液中于电炉上加热,不时用温度计测量温度,当达92℃后,即可拔离电源,当温度低于92℃时,再插上电源,如此反复持续至10分钟左右。⑤待抗原修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。对各种抗原修法的评价。
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用什么方法进行抗原修复?
- 为什么要进行抗原修复?组织在制作过程中,由于化学试剂的作用封闭了抗原,又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲,致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来,为了解决上述的问题,利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。在免疫组化染色后的镜下观察中,有发现这样的结果,阳性物反应不强,时隐时现,表达不均匀,有时可出现假阴性,这是因为:1.组织在用甲醛固定的过程中所形成的醛键可封闭抗原的决定族。甲醛与组织蛋白质类的反应是多样而复杂的,因为它能和多种不同的功能基团结合,在多数情况下在其间形成桥键8。这也是甲醛的一个作用,因为它是一种聚合固定剂,因而能在相邻的蛋白质键间形成桥键的作用。2.甲醛在保存进程中会形成羟甲基,也可封闭抗原决定族。据French和Edsall的研究认为,Z常遇到的甲醇反应,就是加到一个含反应性氢原子的化合物中,形成一个羟甲基化合物。3.在组织固定过程中,甲醛与蛋白质发生交联,形成醛交联蛋白,这种化合物封闭了抗原,使之无法表达出来。为了解决上述存在的问题,更好地暴露出抗原,将其很好地显示出来,目前世界上公认的方法就是必须进行抗原修复。用什么方法进行抗原修复?至今为止,抗原修复有许多种方法,在这些方法中,有的是根据抗体的要求来进行,有的是根据抗原的表达程度来进行,我们则对每种病例每项检测,都要求必须进行抗原修复,以达到抗原全面表达的**状态。物理化学试剂抗原修复法:1.真空负压抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇真空负压处理5分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),真空负压干燥箱预先调至95℃,真空负压处理10分钟。⑤待修复注降至室温的一,PBS洗3次,随后按选好的免疫组化染色方法进行染色。2.微波辐射抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),于微波炉内微波辐射10分钟,如检测Er和Pr则需要20辐射分钟左右。⑤待修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学的染色方法进行染色。3.高压抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④切片放入抗原修复液中,边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1-4分钟。⑤待修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。4.隔水热抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH0.6)中,边同容器一起放入水溶锅中加热,其间应不断用温度计测其温度,待抗原修复液的温度达到有效温度后(92℃↑)。即开始计时,持续40分钟。⑤待抗原修复液恢复至室温后,PBS洗3次,随后按选定好的免疫组化染色方法进行染色。5.电炉加热抗原修复法:①切片脱蜡至水。②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。③自来水洗,蒸馏水洗。④将切片放入抗原修复液中于电炉上加热,不时用温度计测量温度,当达92℃后,即可拔离电源,当温度低于92℃时,再插上电源,如此反复持续至10分钟左右。⑤待抗原修复液降至室温后,PBS洗3次,随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。对各种抗原修法的评价。[详细]
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2018-09-27 10:00
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2018-10-07 10:04
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2018-08-19 10:00
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2017-09-22 16:40
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YY复合膜袋用什么检测仪器
- 检测YY复合膜袋的耐压性能可以用济南三泉中石实验仪器有限公司研发生产的包装耐压强度测试仪NLY-05可用于食品包装袋、纸碗、纸盒耐压试验,也可应用于输液袋、塑料输液瓶、血袋等温度适应性和穿刺部位不渗透性试验。具体实验方法如下:
取5个袋,袋内填充约二分之一袋容量的水,并热合封口(参照生产工艺采用的热合条件)。将试样逐个放在上、下板之间,试验中上、下板应保持水平,不变形,与袋的接触面必须光滑,上、下板的面积应大于试验袋。根据下表规定加砝码保持1分钟(负荷为上加压板与砝码重量之和),目视,不得破裂或泄漏。该指标的检测需用到药品包装复合膜袋快速泄漏装置。
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2018-01-16 17:00
其它
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YY复合膜袋用什么检测仪器
- 一、YY复合膜袋机械性能检测
1.YY复合膜袋内层与次内层剥离强度实验方法:
按照YBB00132002《药品包装用复合膜、袋通则》标准规定,取膜适量,将样品宽度方向两端除去55mm,沿宽度方向均匀取纵、横向15mm,被剥开部分不得有明显损伤。若试样不易剥开,可将试样一端约20mm浸入适当的溶剂(常用醋酸乙酯),待溶剂完全挥发,再进行剥离。试样应在温度23℃±2℃,相对湿度50%±5%的环境中放置4小时以上,并在上述条件下进行实验。将试样剥开部分的两端分别夹在试验机上、下夹具内,使试样剥开部的纵轴与上、下夹具ZX连线重合,并松紧适宜,试验速度为(300±50)mm/min,拉伸方向与未剥开部分呈T型,记录各剥离力值;纵、横向剥离强度平均值应符合下表规定。
2.YY复合膜袋热合强度实验方法:
YBB00132002《药品包装用复合膜、袋通则》中对于药品包装复合膜或袋的相关物理性能指标都有明确规定,其中对于其热合强度的规定如下:取复合袋数个,从每个热合部位裁取15mm宽的试样10条,至少从3个复合袋裁取。按塑料薄膜包装袋热合强度试验方法(QB/T2358-1998)的规定进行。测得值应符[详细]
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2018-01-16 17:08
选购指南
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塑料输液袋用什么检测仪器
- 济南三泉中石实验仪器有限公司专业从事药包材检测仪器的研发生产十几年来,努力的让自家生产的检测设备向GMP标准靠近,近期济南三泉中石的工程师们再发力,研发生产了大批量可实现用户分机权限管理功能和数据追踪功能的药包材检测仪器。就拿塑料输液袋的物理性检测指标来说,该包装的的物理性指标检测仪器都具有三级权限管理功能,可实现实验数据的可追溯性。
国家药包材标准中对塑料输液袋胶塞的注药点密封性、穿刺器动态保持力、穿刺器静态保持力;袋体热合部位的拉伸强度、热合强度;输液袋尾部的吊环的悬挂力强度检测都有相关规定,详细规定和测试方法如下:
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2018-01-19 16:23
选购指南
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玻璃瓶厚度用什么仪器检测好
- 玻璃瓶因其外观美观、容易加工、印刷方便、成本低等特点,成为现代包装中常用的包装材料,主要应用于药品、食品饮料、化妆品等行业。玻璃瓶在吹塑成型过程中受制于温度、设备影响会存在瓶身、瓶底等部位厚度不均。瓶身厚度较薄部位,一般是玻璃瓶力学性能(如载压能力、耐压能力)、阻隔性能(如水蒸气和氧气的透过速率)的薄弱部位,使的整个玻璃瓶的各项性能降低,从而不能很好的适应现代集冲洗、灌装、封盖功能于一体的产品生产线。既然玻璃瓶瓶壁厚度如此重要,那么玻璃瓶的厚度用什么仪器检测?。
济南赛成自主研发的CHY-G 电子壁厚底厚测试仪适用于制药、食品、药品等行业测量玻璃瓶瓶底及瓶壁的厚度检测。仪器在传统的厚度测量仪基础上,增加了稳固瓶子的托盘,避免因瓶子摇摆不定带来的测量误差。[详细]
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输液瓶抗冲击试验用什么仪器好
- 济南赛成的SR-S6玻璃瓶抗冲击试验仪适用于各种啤酒瓶、酒瓶、饮料瓶、输液瓶、抗生素瓶等各类瓶装产品抗冲击能力测试,产品依据GB/T6552-86标准中实验项目规定,玻璃瓶抗冲击试验仪是各啤酒厂、玻璃瓶厂家、质检机构、制药生产企业必备检测仪器。[详细]
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