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FH0948-人肾平滑肌瘤复苏细胞；G-402
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本文由 上海富衡生物科技有限公司 整理汇编
2024-05-30 09:33 69阅读次数
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FH0948-人肾平滑肌瘤复苏细胞；G-402
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细胞冻存及复苏- 细胞冻存及复苏细胞冻存及复苏（慢冻快融）细胞冻存及复苏（慢冻快融）一、材料：材料：、0.胰酶。1、试剂：冻存液（90%FBS+10%DMSO）2、用品：冻存用：吸管（直、弯）、冻存管、血细胞计数板、显微镜、-80℃冰箱。复苏用：烧杯、温度计，细胞培养常规试剂及器材。25%二、方法：二、方法：1、冻存：取细胞90%融合的培养瓶，弃去培养液，加入0.胰酶0.消化2～3min，镜下观察，待细胞皱缩变圆后倒去胰酶，以冻存液1.～2ml中和以中止消化。吹打瓶底的每一个角落，注意不要产生气泡。待细胞基本全部吹打下来后，将吸管插入液面下，反复吹打20～30次，以制成单细胞悬液。将细胞转移至冻存管中，在4℃放置30min，-20℃放置2h预冻，以多层脱脂棉充分包裹后放入-80℃冰箱中保存。2w后可去掉包裹继续冻存。注意：细胞浓度细胞冻在一管中。注意：细胞浓度>106/支，可将2瓶75ml细胞冻在一管中。支2、复苏：取冻存管，立即投入39℃水中使之融化。放入无菌室后，外壁消毒，吸出冻存液以十倍培养液稀释，接种于培养瓶中。加培养液的时候要缓慢的加入，以减少渗透压的急剧变化造成细胞的死亡。如离心：先将培养基加入离心管大约8ml，然后将细胞冻存液滴在培养基液面上，然后离心，因为细胞重，被离心到底部了，而DMSO都还是在上清液里面，弃上清，重悬细胞加入培养瓶培养。55ml25%三、三、注意事项：注意事项：1、细胞冻存：、细胞冻存：（1）**时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好。不要选择细胞状态不好时冻存（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变）。6（2）细胞浓度：冻存时细胞浓度低于1～5×10/ml时复苏很难成功。可以离心后调整细胞浓度。（不要重新洗细胞）（3）盖子要紧：冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。（4）选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。单薄的冻存盒因壁太薄，细胞会被迅速降温。（5）不要在-80℃放置太久，时间不宜超过半年。（冰箱的温度难以恒定：开门/关门，电压不稳等），应尽快转入液氮。（6）应保证细胞全部浸在液氮液面下。（7）每支冻存管都标上细胞的名称，冻存时间，并记录在册。2、复苏：、复苏：（1）核查记录册及冻存管上细胞的名称、时间是否一致。（2）水浴时间不可太长：适当提高水浴温度（37度～40度），要是冬天，就选用保温盒。（3）冰盒内时间不宜太长：复苏1h内应加入新的培养液。（高浓度DMSO防止胞内形成冰晶，冻存时保护细胞，但复苏融解后，浸泡时间太久会，对细胞有毒性）。（4）有些细胞复苏后一星期才有起色，不要换液，耐心等待两周后再做决定[详细]
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- 牛肾细胞说明书
- 牛肾细胞说明书一．产品简介1、产品名称：牛肾细胞CalfKidneyCells2、组织来源：牛的肾组织3、产品规格：25cm2培养瓶4、细胞简介：牛肾细胞分离自正常牛肾组织，细胞为圆形、多角形，单层贴壁生长。细胞质丰富，细胞核为圆形或卵圆形，部分细胞核周可见小空泡。体外培养的牛肾细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。本公司生产的牛肾细胞采用机械分离法制备而来，细胞总量约为1×106个/瓶，细胞纯度可达80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。5、培养基信息：1)培养基类型：HAM’F122)添加因子：Insulin；EpidermalGrowthFactor(EGF)；Penicillin；Streptomycin；FBS二．使用方法客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。1、取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态；2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养；3、细胞传代1)吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次；2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5ml，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；4)待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。三．注意事项1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月；2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作；3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态；4、该细胞只可用于科研。[详细]
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2018-11-16 10:02
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