免疫组化技术总结

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• 免疫组化技术总结

  资料转自丁香园：文档为免疫组化全园资料整理、经验和教训总结、亲身案例讲述、难题集锦等等，多是原创经验和心得体会，难得的免疫组化技术文档。[详细]

  2018-10-20 10:00

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• 气相色谱分离技术总结

  气相色谱分离技术总结[详细]

  2009-06-19 00:00

  操作手册

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• 免疫组化问题解答

  免疫组化问题解答[详细]

  2013-12-21 00:00

  安装说明

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• 免疫组化基础知识

  免疫组织化学的概念：免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验所用的抗体有哪些？免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些？实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本Z常用、Z基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中的组织标本制作方法。石蜡切片为什么要做抗原修复？有哪些方法？石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。常用的抗原修法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01mol/L的柠檬酸盐缓冲液。免疫组化常用的染色方法有哪些？根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素抗生物素染色法Z常用。抗体交叉反应的原因：指抗体除与其相应的抗原发生特异性反应外还与其它抗原发生反应。产生的原因有以下几个方面：1.抗原特异性指用于免疫动物的抗原性物质中含有多种抗原分子，它引起动物产生针对多种抗原分子特异性的相应抗体。任何其它物质只要含有一种或多种与上述物质相同的抗原分子，必将与上述多特异性的抗血清发生交叉反应。2.共同决定簇即两种抗原分子中都含有相同的抗原决定簇。3.决定簇相似，两种不同的抗原决定簇，如果结构大致相同，由于空间构象关系，某一决定簇的相应抗体可以与大致相同的决定簇发生交叉反应。当然抗原一抗体之间构象相似时的结合力小于吻合时的结合力。多抗和单抗特性比较：1.均一性。一种单抗中，每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同，只有一种Ig亚类。即单抗是一种纯度很高的均一抗体。而从不同动物，不同时期所得到的多抗，各有不同的化学组成。多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。2.稳定性。单抗的稳定较差，对PH变化敏感，对热不稳定，提纯过程中易变性，而多抗的稳定性则较好。3.特异性。单抗是单一地针对抗原的某一决定簇，所以用它进行血清学反应时，特异性强，敏感性高，一般不发生交叉反应。而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合，所以特异性较差，较易引起交叉反应。4.重复性。单抗的重复性好，而多抗每批都不一样。5.沉淀反应。多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀，而单抗只与抗原结合产生二聚体，不能直接形成抗原抗体沉淀物。抗体的保存：抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如储存的抗体中蛋白浓度很低（10-100mg/L），就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。绝大多数已稀释的抗体应存在4℃-8℃条件下，以免冻融对抗体蛋白产生有害效应。抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件下，并避免反复冻融。冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应避免用高温快速解冻。被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之。为防止细菌污染，可于抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。抗体经真空冷冻干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀释后的单抗应加入0.1%叠氮钠浓度。大多数稀释抗体可进行冷冻保存，少数抗体可能会丢失抗原活性。大多数单抗，只要蛋白浓度适当，可在4℃下保存数月。[详细]

  2018-09-27 10:00

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• CD90免疫组化试剂盒

  CD90免疫组化试剂盒该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性CD90抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD90一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。试剂盒所含试剂：试剂A通透液：0.1%Triton-X10010mL（选用）试剂B封闭缓冲液（封闭用）20mL试剂C（原装进口分装）已稀释的即用型CD90一抗（2.5ml）试剂D（原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG1支（浓度1.5mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支（浓度1μM，稀释比1:50~1:200）100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修复液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mMNaOH调pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修法见附1）*注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃；7.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30min；10.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；11.封闭：滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；12.加HRP-SA：滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20nM），37℃湿盒中孵育30min；13.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min），TBS洗涤（2×5min）；14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像：显微镜下观察成像。注意事项：1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween20，否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1：抗原修法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]

  2018-10-31 10:00

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• 免疫组化试剂盒说明书

  免疫组化试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织内的特异性Dazl抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的Dazl一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。用户自备试剂：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修复液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g加蒸馏水700mL，用10mMNaOH调pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修法见附1）*注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃过一夜；7.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30min；10.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；11.封闭：滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；12.加HRP-SA：滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20nM），37℃湿盒中孵育30min；13.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min），TBS洗涤（2×5min）；14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像：显微镜下观察成像。注意事项：1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween20，否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1：抗原修法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 免疫组化染色试剂盒说明书

  免疫组化染色试剂盒说明书[详细]

  2014-06-23 00:00

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• 小鼠 Thy1 免疫组化试剂盒

  小鼠ELISA试剂盒该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性Thy1抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的Thy1一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。试剂盒所含试剂：试剂A通透液：0.1%Triton-X10010mL（选用）试剂B封闭缓冲液（封闭用）20mL试剂C（原装进口分装）已稀释的即用型Thy1一抗（2.5ml）试剂D（原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG1支（浓度1.5mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支（浓度1μM，稀释比1:50~1:200）100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修复液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mMNaOH调pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修法见附1）*注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃7.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30min；10.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；11.封闭：滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；12.加HRP-SA：滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20nM），37℃湿盒中孵育30min；13.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min），TBS洗涤（2×5min）；14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像：显微镜下观察成像。小鼠ELISA试剂盒注意事项：1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween20，否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附11：抗原修法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]

  2018-09-27 10:00

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• 免疫组化Elivison二步法

  1、石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。2、取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗2×3’。（注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定）3、每张切片加1滴3%H2O2，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。4、除去PBS液，每张切片加1滴相应的**抗体（相应稀释倍数），室温下孵育2小时。5、PBS冲洗3×5’。除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂，室温下孵育20分钟。PBS冲洗3×3’。6、除去PBS液，每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30分钟。PBS冲洗3×5’。7、除去PBS液，每张切片加1滴新鲜配制的DAB液（二氨基联苯胺），显微镜下观察5分钟。8、苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。[详细]

  2018-09-27 10:00

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• 人IL-29 免疫组化试剂盒

  该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性IL-29抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的IL-29一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。注：本产品仅供实验室科学研究。本步骤是根据我们长期实验得出的有效步骤，不一定是Zyou方法，请客户根据具体科研实验情况进行调整和优化，并欢迎客户和我们探讨。[详细]

  2018-10-01 10:00

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• 免疫组化试剂盒使用说明书

  上海哈灵生物科技有限公司免疫组化试剂盒使用说明书保存方法：2-8℃保存。有效期：一年。生产日期：见封口。工作原理：辣根过氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不会遮盖抗原的结合部位，具有较高活性及特异性，可溶性佳，生成的产物不扩散，可作用于多种底物，产生不同颜色且HRP穿透力强，易进入细胞内。DAB在H2O2存在的情况下，可以作为HRP的电子供体，产生褐色的不溶颗粒，可作为显色的试剂。试剂盒内容：名称规格10.01mol/LpH6.0枸橼酸盐缓冲液0.5L2PBS缓冲液1L3广谱二抗1.5mL430%H2O25mL5DAB显色液I0.3mL6DAB显色液II0.3mL自备试剂：无水乙醇、苏木素。操作步骤：1.60℃常规脱蜡至水后，将石蜡切片先后浸入二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ各10min。然后逐级降浓度酒精入水，每次3-5min。①无水酒精3－5min②90%酒精3－5min③85%酒精3－5min④75%酒精3－5min⑤PBS洗涤3次每次5min2.热修复抗原：将切片置于0.01mol/LpH6.0枸橼钠缓冲液，微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10min后，反复1-2次，置于室温自然冷却。0.01mol/LpH7.0左右的PBS洗涤3次，每次5min3.消除内源性过氧化物酶：用3%H2O2室温孵育5-10min，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次，每次5min；4.滴加一抗：滴加适当稀释的一抗到切片上，37℃孵育一定时间或者4℃隔天，pH7.4的PBS洗涤3次，每次5min。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）5.加入广谱二抗，37℃孵育一段时间，取出后PBS洗涤3次，每次5min。6.DAB显色：取DAB显色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室温显色，镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。7..观察显色后自来水冲，苏木精复染1-2min，，自来水冲10min，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，干燥，分析拍照[详细]

  2024-10-08 14:03

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• 小鼠IL-10 免疫组化试剂盒说明书

  小鼠IL-10免疫组化试剂盒说明书该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性IL-10抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的IL-10一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。小鼠IL-10免疫组化试剂盒所含试剂：试剂A通透液：0.1%Triton-X10010mL（选用）试剂B封闭缓冲液（封闭用）20mL试剂C（原装进口分装）已稀释的即用型IL-10一抗（2.5ml）试剂D（原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG1支（浓度1.5mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支（浓度1μM，稀释比1:50~1:200）100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修复液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mMNaOH调pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：小鼠IL-10免疫组化试剂盒石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修法见附1）*注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃7.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30min；10.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；11.封闭：滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；12.加HRP-SA：滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20nM），37℃湿盒中孵育30min；13.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min），TBS洗涤（2×5min）；14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像：显微镜下观察成像。注意事项：1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween20，否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1：抗原修法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、小鼠IL-10免疫组化试剂盒直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]

  2018-11-04 10:00

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• 免疫组化的方法和优点

  上海恒远生物科技有限公司专业供应各种属elisa试剂盒，提供免费代测服务，保证实验结果客观真实性。我公司对试剂盒质量1**%保证，若存在质量问题，我们无条件包退换。若需要了解试剂盒的详细信息，请来的咨询：电话：021-60520498业务QQ:1005074258何经理免疫组化的方法和优点一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（**抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。二、免疫组织化学染色方法1、按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。2、按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）;与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3、按结合方式可分为抗原抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是Z常用的方法。三、几种常用免疫组织化学方法的原理1、免疫荧光方法是Z早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。2、免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前Z常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的当属PAP法、ABC法、SP法等。3、免疫胶体金技术免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。四、免疫组化技术的优点1、特异性强免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。2、敏感性高在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3、定位准确、形态与功能相结合该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。人集落刺激因子（CSF）ELISAKitHumancolony-stimulatingfactor,CSFELISAKit人激动异构酶/细胞分裂素MB（CKMB）ELISAKitHumancytokininMB,CKMBELISAKit人肌细胞生成素（MYOG）ELISAKitHumanmyogenin,MYOGELISAKit人γ干扰素诱导单核细胞因子（MIGF/CXCL9）ELISAKitHumanmonocyteinterferongammainducingfactor,MIGFELISAKit人干扰素诱导T细胞趋化因子（ITAC/CXCL11）ELISAKitHumanInterferoninducibleT-cellChemoattractant,I-TACELISAKit人白细胞分化抗原14（CDl4）ELISAKitHumanclusterOfdifferentiation,CDl4ELISAKit人肥大细胞类胰蛋白酶（MCT）ELISAKitHumanmastcelltryptase,MCTELISAKit人凋亡诱导因子（AIF）ELISAKitHumanapoptosisinducingfactor,AIFELISAKit人凋亡蛋白酶激活因子1（ICAD）ELISAKitHumanapoptosisproteaseactivatingfactor-1,ICADELISAKit人白细胞共同抗原（LCA/CD45）ELISAKitHumanleukocytecommonantigen,LCA/CD45ELISAKit人白细胞分化抗原4（CD4）ELISAKitHumanclusterOfdifferentiation,CD4ELISAKit小鼠正常T细胞表达和分泌因子（RANTES/CCL5）ELISAKitMouseregulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RANTESELISAkit人信号转导分子（Smad1）ELISAKitHumansignaltransduction-Smad1ELISAKit人信号转导分子7（Smad7）ELISAKitHumansignaltransduction-Smad7ELISAKit[详细]

  2018-11-16 10:02

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• α-SMA免疫组化ELISA试剂盒说明

  α-SMA免疫组化ELISA试剂盒说明[详细]

  2024-09-29 06:59

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• 冻干粉针异常现象总结

  冻干粉针异常现象总结[详细]

  2015-02-06 00:00

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• 电子地磅称知识总结

  电子地磅称在使用过程中，总会出现一些问题吧下面我们就来讲一讲电子地磅称的有关知识总结吧，希望我们能对电子地磅称有一个高层次的认识。。[详细]

  2018-10-07 10:04

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• X荧光问答总结

  X荧光问答总结[详细]

  2024-09-12 21:51

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• e+h雷达物位计说明总结

  e+h雷达物位计说明总结雷达物位计具有低维护，高性能、高精度、高可靠性，使用寿命长等优点。在与电容，重锤等接触式仪表相比较，具有无可比拟的优越性。微波信号的传输不受大气的影响，所以它可以满足工艺过程中挥发性气体、高温、高压、蒸汽、真空及高粉尘等恶劣环境的要求。该产品适用于高温、高压、真空、蒸汽、高粉尘及挥发性气体等恶劣环境。可对不同料位进行连续测量。该仪器主要技术指标达到或优于国内外同类产品,且安装调试简便，可以单台使用，也可组网使用，可广泛应用于冶金、建材、能源、石化、水利、粮食等行业。MicropilotM可用于对液体、浆料、淤泥和固料进行连续、非接触式物位测量。测量不受介质改变、温度变化、气层或蒸汽的影响。FMR230特别适用于缓冲罐和过程罐的物位测量FMR231用于需强化学品质适应性的测量场合FMR240小喇叭天线(40mm)的FMR240特别适用于小容器中的物位测量，测量精度可达±3mmFMR244带喇叭天线，具有强抗腐蚀能力FMR245抗腐蚀能力强，测量温度高达200℃，易于清洗e+h雷达物位计设定说明：1、基本设定⑴首先选择罐体形状，可根据需要选择。⑵介质特性的选择是由溶液的电导率大小决定的。⑶一般，如果罐体带搅拌，因此在条件选项里进行设置。⑷进行空罐标定和满罐标定，根据现场的实际情况将计算好的数据输入即可。2、安全设定在安全设定界面可根据生产需要设置报警输入输出等参数。3、线性化设置无论罐体形状怎样，都需要计算出溶液的Z高高度即物位和溶液距测量参考点的高度即空高。然后进行自定义单位和线性化的选择。4、扩展标定由于储罐内的搅拌器和罐壁都有可能产生回波，为了不影响测量精度，因此必须选择干扰回波YZ图，也就是将测量距离与现实距离进行比较。距离太大或太小带来的干扰误差都不能用YZ图消除，只有当检查距离选择OK时，YZ图用于当前的测量回波，YZ范围由技术人员根据现场需要计算出。[详细]

  2024-09-13 06:43

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• 细胞染色方法总结

  细胞染色方法总结[详细]

  2024-09-28 21:53

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• 兔子说明书CD134 免疫组化试剂盒说明书

  兔子说明书CD134 免疫组化试剂盒说明书[详细]

  2016-07-06 00:00

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