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大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书

本文由 上海索宝生物科技有限公司 整理汇编

2018-09-02 10:00 813阅读次数

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大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。药品名称:通用名:大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)酶联免疫分析试剂盒使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中载脂蛋白A1(apo-A1)的含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)水平。用纯化的大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入载脂蛋白A1(apo-A1),再与HRP标记的载脂蛋白A1(apo-A1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的载脂蛋白A1(apo-A1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)的含量。试剂盒组成120倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(1800μg/ml)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本处理及要求1.血清、血浆标本可直接测定;2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。3.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上按序设标准品孔10孔,在**、第二孔中分别加标准品100μl,然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;再各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后,在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉;再各取50μl分别加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200μg/ml,800μg/ml,400μg/ml,200μg/ml,100μg/ml)。2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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