冻干机真空系统常见问题分析与解决

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• 冻干机真空系统常见问题分析与解决

  冻干机真空系统常见问题分析与解决[详细]

  2016-08-18 00:00

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• ELISA实验中常见问题的解决

  ELISA操作常见问题1．样品稀释酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。2．试剂盒平衡试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。3．样品和试剂的混匀稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。4．加样在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。5．温育温育是ELISA测定中影响测定成败Z为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。Z为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改变说明书操作，使用自己喜欢的温育时间和温育温度，这样造成一些不必要的麻烦。因为，不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择，随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。6．洗板固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗板对于ELISA测定来说，也是极其关键的一步。洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。7．边缘效应使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较ZX孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与ZX孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。8．显色显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低；显色时间过长，空白或者非特异性显色增加。9．比色比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。其次，单波长或双波长比色选择的问题。所谓的单波长比色即是通常的以对显色具有Zda吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定；而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长如630nm下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；非敏感波长下测定即改变波长至一定值，使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。Z后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点。由于ELISA测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值，故而在ELISA测定比色时，**是使用双波长比色。综上所述，尽管ELISA测定的操作步骤非常简单，但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表。操作过程中可能出现的问题和解决方法问题可能原因解决方法显色淡，灵敏度偏低1、试剂盒在运输途中时间太长，温度太高尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温2、试剂盒未充分平衡试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）。3、培养箱温度不足37℃注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意4、保温时间不足校正定时钟准确定时5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数6、移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，**一次性使用7、蒸馏水水质有问题使用新鲜合格的蒸馏水8、底物作用时间不足准确定时背景深，全部呈有色,1、洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留浓缩洗液准确配制；10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释；充分洗涤，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染2、样品污染样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长调整培养箱温度，准确定时4、吸嘴重复使用，未洗净或消毒不彻底吸嘴尽可能一次性使用5、蒸馏水被污染使用新鲜蒸馏水6、酶等试剂混用不同批号试剂勿混用7、一次实验的标本量过多，加样时间太长，导致实际反应时间延长合理安排实验，避免几块酶标板同时加样重复性不佳1、样品数量多少不一，加样时间有长有短重复某一样品时，加样时间尽可能与**次接近2、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性3、加样量不一致样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴出现白板，阳性对照不显色显色液变质更换新的显色液洗涤液配制有误请按说明书所示稀释倍数配制未加酶结合物而认为已加入注意不要漏加终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用每次加液前均应看清标签[详细]

  2018-09-02 10:00

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  为保证校准结果的准确可靠，本文从校准试块、耦合剂、校准方法、测厚仪探头和声速几个方面分析超声波测厚仪校准工作中显示示值不准确的原因，并提出了相应的建议。[详细]

  2018-11-06 14:49

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• 蠕动泵常见问题与解答

  蠕动泵常见问题与解答[详细]

  2024-09-28 07:08

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  蠕动泵常见问题与解答[详细]

  2024-09-28 07:10

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  TREF常见问题分析[详细]

  2011-09-22 00:00

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• CRYSTAF 常见问题分析

  CRYSTAF 常见问题分析[详细]

  2011-09-22 00:00

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• 德国赫斯曼交换机的常见问题及解决方式

  德国Hirschmann（赫斯曼）作为自动化技术的专家，赫思曼的许多设计都是具有革新性的，这些方案能够充分满足客户在性能、效率和投资可靠性方面的要求。作为IAONA（工业自动化开放网络联盟）组织的创始人之一，赫思曼在以太网技术的确立和在工业领域的标准化上扮演了主要的角色。EPSG（以太网Powerlink标准化组织）倡导的Powerlink已提供了一个开放的平台，可以通过以太网实现硬实时的应用，例如机器人控制等。赫思曼也是EPSG的创始人之一。　　为了提高局域网的运行维护效率，我们需要在平时积累各种交换机故障排除经验，以便在遇到故障时，能够快速地将交换机的故障解决掉。　　1.德国Hirschmann（赫斯曼）交换机解决数据严重掉包故障　　网络管理员先尝试着将集线器的进线直接与故障工作站连接，之后再对服务器执行ping命令测试，测试结果发现没有出现数据包延时现象，也没有发生数据掉包现象，测试结果很正常。接着网络管理员又在安装了10M网卡的旧计算机中进行ping命令测试操作，测试结果竟然也是正常的，而出现故障的计算机恰好是一些安装了100M网卡设备的新工作站。网络管理员反复对这种现象进行了分析，会不会是工作站的网卡传输速度和交换机的传输速度存在匹配问题呢?想到这一点，网络管理员于是在那些故障计算机中将100M网卡设备的传输速度强制调整为10M，之后再进行访问测试，结果发现故障现象居然没有了，很显然上面的故障的确是由于速度不匹配引起的。日后，当我们遇到相同的故障现象时，不妨仔细检查故障工作站与交换机的传输速度是否匹配，要是不匹配的话，只需要在故障工作站中强行修改网卡设备的传输速度，确保网卡设备与交换机的工作速度保持匹配。　　2.德国Hirschmann（赫斯曼）交换机解决IP报文无法转发故障　　如果本地交换机的接口链路层协议状态以及该接口的物理状态全部都显示为UP，而交换机无法正常转发IP数据报文时，那多半是本地交换机指定协议发现路由参数没有设置正确，或者是本地交换机的静态路由没有设置生效。此时，我们可以利用telnet命令远程登录进目标交换机后台管理界面，并进入到命令行状态，输入字符串命令“displayiprouting-tableprotocolstatic”，单击回车键后来查看本地交换机有没有正确配置静态路由，要是没有配置的话需要及时重新进行配置;　　在确认上面的配置正确后，再执行字符串命令“displayiprouting-table”，来检查本地静态路由有没有设置生效，要是没有生效的话需要重新启用并设置好静态路由，如此一来就能解决IP报文无法转发的故障了。　　3.德国Hirschmann（赫斯曼）交换机解决主机无法Ping通故障　　在管理维护网络时，我们时常会在交换机上对局域网中的某台主机IP地址进行Ping命令测试，在测试过程中要是遇到目标主机IP地址无法被Ping通的故障现象时，我们究竟该如何来排除呢?在确认目标主机已经开通电源，并且该系统自身工作状态一切正常的情况下，我们可以在交换机中进行如下排查操作：　　首先通过telnet命令登录进目标交换机后台管理界面，在该界面的命令行中执行字符串命令“displayinterfaces”，从其后弹出的结果界面中看看目标主机与本地交换机所连端口的IP地址是否处于同一个网段，或者检查本地交换机指定连接端口的工作模式是否为“trunk”类型，如果这些参数设置不正确的话，我们必须及时将它们修改过来。　　其次执行字符串命令“displayarp”，从弹出的结果界面中仔细检查本地交换机管理维护的ARP表内容是否设置正确，一旦发现有不正确的记录或条目，必须及时将它修改过来。　　接着检查本地交换机连接目标主机的通信端口处于哪一个虚拟子网中，找到对应的虚拟子网后，查看该虚拟子网有没有正确配置VLAN通信接口，要是已经配置了的话，我们不妨再检查该VLAN通信接口的IP地址是否和目标主机的IP地址位于相同的工作子网中，如果发现配置不正确的话，必须及时修改过来。　　要是上面的各项配置参数都正常的话，本地交换机还无法Ping通局域网中的目标主机地址时，那我们不妨在本地交换机系统中启用ARP调试开关，以便详细地检查本地交换机是否能够正确地发送ARP报文和接受ARP报文，要是本地交换机只能对外发送ARP报文而无法从外面接受ARP报文时，那故障原因很可能出在以太网的物理链路层，此时我们需要ZD对物理链路层进行检查。　　4.德国Hirschmann（赫斯曼）交换机解决重新设置VLAN麻烦　　在管理维护单位局域网网络的时候，要是连接普通交换机的级联端口发生改变时，那么之前在该交换机系统中划分设置的VLAN往往就无法正常发挥作用了。如此说来，难道我们只有重新划分设置VLAN吗?如果真是这样的话，那网络维护工作量显然是很大的；其实，在改变普通交换机的级联端口后，我们只需要进入交换机的后台管理界面，修改一下级联端口的工作模式，以便让所有的VLAN访问都能通过，这样的话就能避免重新设置VLAN操作了。现在我们就以某单位的局域网为例，来向各位详细介绍一下交换机的具体设置步骤：　　假设该单位局域网共有6个VLAN，其中S1交换机位于A子网中，S2交换机位于B子网中；Z近单位新购买了几台工作站，现在需要把S1交换机移动到B子网中，而之前S1交换机是在端口24上用光纤线缆与单位局域网的核心交换机直接相连的。为了避免在交换机系统中重新划分VLAN，我们可以改变S1、S2交换机的端口工作模式。例如，我们可以先查看一下S1交换机的端口设置情况；在进行这种检查时，可以先通过telnet命令远程登录到交换机的后台管理界面，并执行字符串命令“displayinterfaces”，这样我们就能查看到该交换机各个端口的具体配置情况了。从上述命令返回的结果中，我们看到与S2交换机保持级联关系的S1交换机26端口状态为“interfaceethernet0/26，portaccessvlan2”，通过该状态我们不难明白S1交换机只属于VLAN2，也就是说该交换机只允许来自VLAN2中的工作站通行，其他VLAN中的工作站都无法通行;当S1交换机改变摆放位置后，它肯定会位于新的VLAN中，为了让新VLAN中的所有工作站都能通行，我们需要在这里将S1交换机的26端口工作模式修改为“trunk”，这样一来S1交换机就不需要重新划分设置VLAN，就能让新VLAN中的所有工作站都可以通行了。　　也许有不少用户会感到纳闷，为什么S1交换机之前可以和单位局域网网络正常通信呢?原来S1交换机之前是通过光纤线缆与单位核心交换机相连的，那个光纤连接端口的工作模式已经被设置为了“trunk”，当S1交换机的摆放位置发生变化后，由于没有使用光纤线缆来连接交换机，所以对应的光纤连接端口也就没有作用了。　　在修改S1交换机的26端口工作模式时，我们可以先远程登录进该交换机的后台管理界面，并在该界面的命令行中执行字符串命令“system”，将S1交换机的工作状态切换到系统配置状态，接着执行“interfaceethernet0/26”命令进入S1交换机的第26号连接端口配置状态，再在该状态下输入字符串命令“portlink-typetrunk”，单击回车键后，S1交换机的26号连接端口工作模式就被成功修改成“trunk”类型了；为了让局域网中的所有VLAN都能通过该端口访问S1交换机，我们还需要执行字符串命令“porttrunkpermitvlanall”，以便指定26号连接端口允许来自所有VLAN中的工作站访问。按照同样的操作，我们可以修改S2交换机的级联端口工作模式，确保局域网中的所有工作站都能访问S2交换机。[详细]

  2018-09-18 10:00

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  变频器的常见问题与解答[详细]

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