使用Skyline 创建单克隆抗体的 MRM 方法

使用Skyline 创建单克隆抗体的 MRM 方法

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2018-08-26 10:00 588阅读次数

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本文向您介绍使用Skyline软件和岛津LCMS-8050/8060创建MRM方法，对生物样品中的单克隆抗体进行特异性检测的分析示例。岛津LCMS-8050/8060和Skyline软件的组合使用，缩短定量分析方法的创建时间。

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使用Skyline 创建单克隆抗体的 MRM 方法

本文向您介绍使用Skyline软件和岛津LCMS-8050/8060创建MRM方法，对生物样品中的单克隆抗体进行特异性检测的分析示例。岛津LCMS-8050/8060和Skyline软件的组合使用，缩短定量分析方法的创建时间。[详细]
2018-08-26 10:00
产品样册
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使用 Skyline 创建单克隆抗体的 MRM 方法

使用 Skyline 创建单克隆抗体的 MRM 方法[详细]
2024-09-30 17:32
期刊论文
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使用GamryCOM创建新的应用

IntroductionHerearethebasicstepsforcreatingabasicapplicationwithGamryCOM.OnthesecondpageareerrorcodesreportedbyGamryCOM.Pleaseseethedocumentationandotherexamplecodeformoreinformation.Thespecificsofeachstepanderrorsvarydependingontheprogrammingenvironmentused.[详细]
2018-08-30 10:00
产品样册
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使用QCM-D研究单克隆抗体的表面相互作用

使用QCM-D研究单克隆抗体的表面相互作用[详细]
2024-09-17 01:53
实验操作
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使用适用于 GC/TQ 的 Agilent MassHunter Optimizer 根据 US EPA 方法 8270 进行自动化 MRM 方法开发

本应用简报展示了如何使用适用于 GC/TQ 的 Agilent MassHunter Optimizer 实现高度自动化的整体多反应监测 (MRM) 数据采集方法开发。即使在存在色谱干扰的情况下，用于 GC/TQ 的 Optimizer 也可以通过质谱解卷积可靠地鉴定母离子。在开发MRM 数据采集方法时，该工具可节省大量时间并减少手动审查工作。采用与美国国家环境保护局 (EPA) 方法 8270 相关的 83 种化合物的混合物挑战该工艺，并评估共流出物对 MRM 方法开发的影响。 Optimizer 工具的主要优势包括： • 节省 MRM 方法的开发优化时间 • 自动完成并减少手工工作 • 重现性 • 从 GC/MSD 方法平稳过渡至 GC/TQ • 内置审查工具[详细]
2020-11-19 16:03
应用文章
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ELISA技术测定单克隆抗体效价方法

1.深入了解ELISA法测定抗体效价的原理。　　2.掌握ELISA法测定单克隆抗体效价的方法。　　二、实验原理　　ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标抗体/酶标抗原，称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后，作用于底物使之呈色，根据颜色的有无和深浅，定位或定量抗原/抗体。ELISA试剂盒是免疫酶技术的一种，其特点是利用聚苯乙烯微量反应板（或球）吸附抗原/抗体，使之固相化，免疫反应和酶促反应都在其中进行。在每次反应后都要反复洗涤，这既保证了反应的定量关系，也避免了末反应的游离抗体/抗原的分离步骤。在ELISA法中.酶促反应只进行一次，而抗原、抗体的免疫反应可进行一次或数次，即可用二抗（抗抗体）、三抗再次进行免疫反应。　　目前常用的几种ELISA方法有：测定抗体的间接法，测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验采用间接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为：首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内，加待测抗体，保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质，加酶标抗抗体，保温后洗涤，加底物保温30分钟后，加酸或碱终止酶促反应，用目测或光电比色测定抗体含量。　　三、仪器、原料和试剂　　仪器　　聚苯乙烯96孔酶标板、微量移液管、酶联免疫阅读仪、水浴锅。　　原料　　单克隆抗体　　试剂　　1.抗原及酶标记抗体　　①抗原：兔抗人IgG（RabbitAanti-humanIgG，CodeNo.A0423）;　　②酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP（RabbitAnti-mouseIgG-HRP，CodeNo.P0260）;均为　　DAKO公司产品，使用时按照说明书要求稀释。　　4.洗涤液（含0.05%Tween20的PBS）：1LPBS中加入Tween-20500μL。　　5.ELISA试剂盒封闭液（含1%牛血清白蛋白，0.1%Tween20的PBS）：10mLPBS中加入100mgBSA，10μLTween-20。6.底物溶液　　①磷酸钠盐缓冲液（0.1mol/LpH6.0）：称Na2HPO412H2O2.2g，NaH2PO42H2O6.84g，用蒸馏水溶解，定容至500mL。　　②TMB贮液：称60mgTMB溶于10mL二甲基亚砜中，4℃避光保存。　　③底物应用液：现用现配，磷酸钠缓冲液10mL，TNB贮液10μL。30%H2O215μL，混匀。　　7.终止液：2mol/LH2SO4　　四、操作步骤　　①抗原包被：兔抗人IgG作为抗原，用包被液l：8000稀释，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板　　中。4℃放置。　　②洗涤：次日倾去凹孔内的液体，洗涤液洗3次。　　③封闭：加l00μL/孔封闭液，室温放置0.5h。　　④洗涤：用洗涤液洗3次。　　⑤加待测样品（一抗）：将含单克降抗体的细胞培养上清在另块板上用PBS连续稀释（按照1：2或1：10），100μL/孔加到已包被的板上，每个样品平行做两份，PBS或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育1~2h。　　⑥洗涤：用洗涤液洗3次。　　⑦加酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP，用封闭液l：8000稀释，100μL/孔，加盖37℃恒温箱温育1h。　　⑧洗涤：用洗涤液洗5次，蒸馏水洗2次。　　⑨显色：ELISA试剂盒加新鲜配制的底物溶液100μL/孔，室温暗处放置5～30min，显示蓝色。　⑩终止反应、比色：加50μL/孔终止液.颜色变黄;用酶标仪测定450nm处各孔的吸光值，阳性反应的Zda稀释度为待测样品的效价。[详细]
2018-09-14 10:01
产品样册
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布鲁菌单克隆抗体乳胶凝集试验方法的建立

布鲁菌单克隆抗体乳胶凝集试验方法的建立[详细]
2013-05-25 00:00
应用文章
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使用适用于 GC/TQ 的 Agilent MassHunter Optimizer 针对大麻中的农药进行自动化 MRM 方法开发

本应用简报展示了如何使用适用于 GC/TQ 的 Agilent MassHunter Optimizer 实现高度自动化的端到端多反应监测 (MRM) 数据采集方法开发。即使在存在色谱干扰的情况下，用于 GC/TQ 的 Optimizer 也可以通过质谱解卷积可靠地鉴定母离子。在开发MRM 数据采集方法时，该工具可节省大量时间并减少手动审查工作。使用美国加利福尼亚州和加拿大规定的 25 种与相关的农药混合物测试该流程。 Optimizer 工具的主要优势包括： • 节省 MRM 方法的开发优化时间 • 可实现自动化并减少手动工作 • 重现性 • 从 GC/MSD 方法平稳过渡至 GC/TQ • 内置审查工具[详细]
2020-11-19 16:00
应用文章
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采用Empower样品组生成器自动创建色谱方法进行方法验证

采用Empower样品组生成器自动创建色谱方法进行方法验证[详细]
2024-09-27 23:50
选购指南
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nSMOL前处理技术结合Skyline软件

本文利用nSMOL前处理试剂包结合Skyline软件，加速抗体药物LCMS方法开发过程，仅在一个工作日就可以完成单个抗体药物LCMS方法的初步优化。实例中贝伐珠单抗共筛选出9个肽段具有典型色谱峰，其中4条肽段与贝伐珠单抗的Fab区域相关，并且这4条Fab区域的肽段响应远高于其他肽段；曲妥珠单抗共有10个肽段具有典型色谱峰，其中8条肽段与曲妥珠单抗的Fab区域相关。实验证明，利用nSMOL技术可以选择性酶解Fab区域，从而降低抗体药物定量肽段开发的复杂性。[详细]
2018-08-26 10:00
产品样册
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Sequence Wizard轻松创建复杂的测试序列

Formoreflexibility,GamryInstrumentsenablestheuserseveralwaystoperformelectrochemicalmeasurements.Theusercanchosefromavarietyofpre-builttechniqueswhicharesubordinatedinspecificgroupsintheFrameworksoftware.Inaddition,Gamry’sconceptof“OpenSourceScripting”allowstheusertomodifytheexperiment’sscriptsourceandtocustomizeexperiments.Forcombiningsingleexperiments,theSequenceWizardcanbeusedwhichisthesubjectofthisapplicationnote.TheSequenceWizardhastheadvantagethatcomplexmeasurementsequencescanbeeasilycreatedbyusingadraganddropapproach.Inthiswaycustomizedexperimentscanbeexecutedconsecutivelywithoutinterferingdisruptions.[详细]
2018-08-30 10:00
产品样册
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恒远告诉您关于单克隆抗体的应用

本公司主营的产品有：试剂盒，生物试剂，血清，细胞，标准品与对照品，抗体等多种试剂，抗体的规格为：0.1ml，0.2ml单克隆抗体问世以来，由于其独有的特征已迅速应用于医学很多领域。主要表现在以下几个方面：一、检验医学诊断试剂作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术，并且单克隆抗体的应用很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于：①病原微生物抗原、抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞及其亚群的检测；④激素测定；⑤细胞因子的测定。单克隆抗体对抗原的识别，与多克隆抗体有很大的不同。不同试剂盒因使用的单克隆抗体不同，识别抗原的位点不同，导致检测结果有一定差异。因此，标准化问题还需要进一步研究。二、蛋白质的提纯单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Separose2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。三、小分子抗体的应用将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导向作用，将化疗药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向ZL。另外，将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。小分子抗体是分子量较小但具有抗原结合功能的分子片段。它有以下独特的优势：分子量小，穿透性强，抗原性低；由于不含Fc段，不会与带有Fc段受体的细胞结合，不良反应少；半衰期短，有利于及时中和及清除毒素；另外，可在原核系统表达及易于基因工程操作。四、抗体融合蛋白的应用1，肿瘤的体内显像诊断单链抗体排除速度快，穿透力强，因此在肿瘤组织中的分布指数较完整抗体分子高。在放射显像时，放射性核素排除较快，对身体危害程度小，显像的本底较低，因此是较为理想的显像定位诊断载体，为肿瘤的诊断提供了新的途径。2．病毒的诊断和抗病毒感染单链抗体为医学上某些至今难以ZL的疾病如病毒病的诊断和ZL提供了新的、GX的免疫制剂。因此用于免疫ZL和诊断显得尤为重要血液性疾病的诊断抗人白血病单链抗体可用于白血病的免疫诊断及分型。上海恒远生物科技有限公司长期供应：进口原装抗体、进口分装抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、单标抗体、双标抗体、多标抗体、一抗、二抗；免疫组化抗体、免疫荧光抗体、流式细胞抗体、免疫细胞化学抗体。更多咨询欢迎您的来电洽谈。[详细]
2024-09-27 23:50
产品样册
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MA373_单克隆抗体中氨基酸分析

MA373_单克隆抗体中氨基酸分析[详细]
2016-07-21 00:00
课件
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兔抗人BP180单克隆抗体

www.biokanu.com兔抗人BP180单克隆抗体产品编号:QD82416规格:20ug形式:0.1ml，浓缩型反应种属:人。鼠，等其他种属未做过相应的检测抗体类型：兔抗人BP180单克隆抗体理化特性：透明溶液，50%油，PBS，pH=7.4±0.1。产品使用浓度：0.5ug-2ug/ml产品应用本抗体适用于IH/WB/ELISA。本抗体根据需要再进行稀释。保存条件：试剂需在-20℃避光条件下进行保存。每次使用后，应立即放回冰箱进行保存。本产品的保质期为12个月。配制成即用型的试剂在4℃避光条件下进行保存。如果试剂不是按产品说明书的条件储存，可能影响其使用效果。本抗体仅供研究使用，不用于临床诊断。[详细]
2018-09-22 10:00
产品样册
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山羊抗兔prx-2单克隆抗体

www.biokanu.com山羊抗兔prx-2单克隆抗体产品编号:QD823412规格:20ug形式:0.1ml，浓缩型反应种属:人。大鼠，小鼠，豚鼠等其余种属未做过相应的检测免疫原：重组prx-2抗体类型：山羊抗prx-2单克隆抗体理化特性：透明溶液（颜色微黄），50%甘，PBS，pH=7.4±0.1。产品使用浓度：0.5ug-2ug/ml产品应用本抗体适用于IH/WB/ELISA。本抗体根据需要用0.01MPBS进行稀释。注：本抗体用于ELISA包被之前，必须使用本公司生产的酶标专用试剂来处理空白酶标板。酶标专用试剂来处理空白酶标板的方法：用1%的Na2HPO4将酶标专用试剂稀释200倍，加入到空白酶标板内（100ul/孔），室温夜，甩干后立即加入用0.01MPBS稀释的包被抗体，再室温夜，之后即可加入封闭液（0.1%BSAin0.01MTBS）。保存条件：试剂需在-20℃避光条件下进行保存。每次使用后，应立即放回-20℃冰箱进行保存。本产品(浓缩型)的保质期为12个月。即用型的试剂，使用时临时配制，4℃避光条件下进行保存（Z长不要超过2小时）。如果试剂不是按产品说明书的条件储存，可能影响其使用效果。本产品开启之前必须离心，2000rpm5分钟。仅供研究使用，不用于临床诊断。[详细]
2018-09-22 10:00
产品样册
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山羊抗兔PPAR-δ单克隆抗体

www.biokanu.com山羊抗兔PPAR-δ单克隆抗体产品编号:QD823496规格:20ug形式:0.1ml，浓缩型反应种属:人。大鼠，小鼠，豚鼠等其余种属未做过相应的检测免疫原：重组PPAR-δ抗体类型：山羊抗PPAR-δ单克隆抗体理化特性：透明溶液（颜色微黄），50%甘，PBS，pH=7.4±0.1。产品使用浓度：0.5ug-2ug/ml产品应用本抗体适用于IH/WB/ELISA。本抗体根据需要用0.01MPBS进行稀释。注：本抗体用于ELISA包被之前，必须使用本公司生产的酶标专用试剂来处理空白酶标板。酶标专用试剂来处理空白酶标板的方法：用1%的Na2HPO4将酶标专用试剂稀释200倍，加入到空白酶标板内（100ul/孔），室温夜，甩干后立即加入用0.01MPBS稀释的包被抗体，再室温夜，之后即可加入封闭液（0.1%BSAin0.01MTBS）。保存条件：试剂需在-20℃避光条件下进行保存。每次使用后，应立即放回-20℃冰箱进行保存。本产品(浓缩型)的保质期为12个月。即用型的试剂，使用时临时配制，4℃避光条件下进行保存（Z长不要超过2小时）。如果试剂不是按产品说明书的条件储存，可能影响其使用效果。本产品开启之前必须离心，2000rpm5分钟。仅供研究使用，不用于临床诊断。[详细]
2018-09-22 10:00
产品样册
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山羊抗兔C-SKI单克隆抗体

www.biokanu.com山羊抗兔C-SKI单克隆抗体产品编号:QD823459规格:20ug形式:0.1ml，浓缩型反应种属:人。大鼠，小鼠，豚鼠等其余种属未做过相应的检测免疫原：重组C-SKI抗体类型：山羊抗C-SKI单克隆抗体理化特性：透明溶液（颜色微黄），50%甘，PBS，pH=7.4±0.1。产品使用浓度：0.5ug-2ug/ml产品应用本抗体适用于IH/WB/ELISA。本抗体根据需要用0.01MPBS进行稀释。注：本抗体用于ELISA包被之前，必须使用本公司生产的酶标专用试剂来处理空白酶标板。酶标专用试剂来处理空白酶标板的方法：用1%的Na2HPO4将酶标专用试剂稀释200倍，加入到空白酶标板内（100ul/孔），室温夜，甩干后立即加入用0.01MPBS稀释的包被抗体，再室温夜，之后即可加入封闭液（0.1%BSAin0.01MTBS）。保存条件：试剂需在-20℃避光条件下进行保存。每次使用后，应立即放回-20℃冰箱进行保存。本产品(浓缩型)的保质期为12个月。即用型的试剂，使用时临时配制，4℃避光条件下进行保存（Z长不要超过2小时）。如果试剂不是按产品说明书的条件储存，可能影响其使用效果。本产品开启之前必须离心，2000rpm5分钟。仅供研究使用，不用于临床诊断。[详细]
2018-09-22 10:00
产品样册
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非对称场流分离系统制备单克隆抗体

非对称场流分离系统制备单克隆抗体[详细]
2024-09-11 17:57
产品样册
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TSK-GEL液相色谱柱在单克隆抗体分离中的应用

TSK-GEL液相色谱柱在单克隆抗体分离中的应用[详细]
2016-02-03 00:00
实验操作
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单克隆抗体 N-糖基化的毛细管电泳和质谱分析

糖基化是Z重要的一种翻译后修饰，指的是将糖基部分连接到蛋白质上。糖基化模式的改变对免疫原性和整体生物活性有很大影响。因此，糖基化表征对基于生物医药的应用至关重要。虽然现在已有多种分析技术被应用于分析 N-糖基化，但低水平糖基化的极ng确测定仍面临着极大的挑战。本应用简报展示了利用毛细管电泳和质谱 (CEMS) 对重组单克隆抗体 (mAb) 糖基化进行分析。此方法包括利用 N-糖苷酶 F (PNGase F) 酶解 mAb 得到多糖，对多糖进行荧光标记（8-氨基吡-1,3,6-三磺酸三钠盐，ATPS），并利用 Agilent 7100 CE 串联 Agilent 6520 精确质量 Q-TOF LC/MS 进行分析。从使用的重组 mAb 中，我们共鉴定出 7 种多糖，从每种多糖成分的相对百分比可知，主要及次要糖基化修饰均有存在。本应用简报证明了高分离速度的 CE 与高灵敏度检测限的 MS 相结合，使 CE-MS 成为一种替代 LC/MS 方法对 mAb 或其它糖蛋白进行糖基化表征的有效且Z有前景的方法。[详细]
2020-05-09 10:44
应用文章
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该会员其他资料: 武器装备使用进口电子元器件管理办法实施细则; TENSOR II 傅立叶变换红外光谱仪产品样册; TLTP高压取能装置; 吖啶红3B荧光熄灭法测定痕量亚硝酸根; 垂柳叶黄酮的微波提取工艺; 常用的数理统计术语介绍; 药物纳米混悬剂谱写纳米释药系统灿烂前景; 海洋监测规范—数据处理与分析质量控制; 化工产品和产品词汇; 户外钢结构广告设施安全检测及评定

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