使用双发射荧光染料监测癌细胞系的线粒体膜电位

本文由 美谷分子仪器（上海）有限公司 整理汇编

2024-10-01 07:06 598阅读次数

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• 使用双发射荧光染料监测癌细胞系的线粒体膜电位

  从研究疾病到评估药物和环境化合物诱导的毒性反应，基于细胞的测定法通常聚焦于线粒体，旨在监测细胞健康。线粒体功能是整个细胞健康的关键指标，线粒体功能障碍与多种疾病 ( 包括帕金森氏病，阿尔茨海默氏病，心力衰竭，局部缺血性疾病和癌症 ) 的关联密切相关。1 此外，罕见疾病的发病机制可能由编码线粒体蛋白的基因或线粒体 DNA 中的突变驱动。[详细]

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  细胞系和细胞的培养正常的人类初级黑色素细胞的FOM103，进行培养MCDB153，2％FBS，螯合10％FBS（Hyclone公司），1×100nmol/L的ET3（VWR），10毫微克/毫升SCF（R＆D系统），20pmol/L的霍乱毒素，4.5纳克/毫升碱性成纤维细胞生长因子（Promega公司），和2mmol/L的升-谷氨酰胺（敏达）如前所述。人成纤维细胞FF2441和黑色素瘤细胞系UACC903，并辅以含10％FBS。绿色荧光蛋白（GFP）标签UACC903细胞中产生了化学实验室。WM35和Sbcl2，径向生长阶段黑色素细胞病变的细胞系中表达绿色荧光蛋白，维持在涂层％的中型企业。通道2至5人包皮角质细胞进行培养在EpiLifeE-介质中（不含血清的HEPES为基础的介质）含1×HKGS，牛垂体提取物，牛胰岛素，牛转，和人EGF（级联生物制剂）作为详细的前面组成的。所有在本文中使用的细胞系被定期监视表型（显微镜下检查细胞的形态），通过比较的生长特性（SRB法的细胞系的倍增时间）和致瘤性的电位，由这些细胞注射到裸鼠测试，这些细胞的肿瘤形成能力。细胞特性或行为的评估机构提供的细胞株的原始股票。[详细]

  2018-10-03 10:00

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  小鼠胶质细胞系来源的神经营养因子使用说明书[详细]

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• 人鳞状癌（SCC）ELISA试剂盒使用说明书

  本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人鳞状癌（SCC）的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人鳞状癌（SCC）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入鳞状癌（SCC）,再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的鳞状癌（SCC）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人鳞状癌（SCC）浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：27ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为18ng/L,12ng/L,6ng/L,3ng/L,1.5ng/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批间应分别小于9%和11%检测范围：1ng/L-20ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-11-07 14:16

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• 双头粉尘采样器使用说明书

  一、概述粉尘采样器是环境监测部门、劳动保护卫生防疫部门用于冶金、矿山、铸造、建材、水泥、陶瓷具有粉尘危害的部门及生产车间等劳动场所，用于环境监测及粉尘浓度的测定。能在温度为10OC~45OC，相对湿度不大于90%；大气压力为86~106kpa，且无爆炸和强震动的工作环境下正常工作。二、结构与性能整套仪器由仪器主体，三脚架两部分组成。三角架是用来支撑仪器主体，其高度在0.7~1.5m之间，并可以根据工作需要进行调节。仪器主机，重约3.6kg，其外形尺寸为230×205×120mm并配有2个采样头。仪器面板上装有2支5~30L/min转子流量计，用于显示两个采样头的流量，同时还可根据不同的情况分别对2个流量进行调节。该仪器配有在999分钟之间任意设定采样时间的电脑控制装置，其精度为0.1%,性能稳定可靠。仪器配置交直流两用电源。采样时，当交流电源突然中断时，直流电源会自动切换继续工作。其中直流电源采用体积小，重量轻，容量大的锂电池，一次充满后可连续工作120分钟。仪器背部配有电源插座，保险座，直流开关和两个采样头。其气路示意图如下：1、采样头2、玻璃转子流量计3、流量调节阀4、抽气泵按键功能说明复位充电中途停电，虽未充满但能采样工作，此时需按此键使仪器转入采样工况。加键，按下此键不松开，采样设定时间不停地自动加1，松开即停。减键，按下此键不松开，采样设定时间不停地自动减1，松开即停。采样在采样时间设定好的状态下，按下此键采样开始，到设定时间即停，如需中途停止采样再按下此键即停。充电按下此键，充电开始，充电指示灯亮。仪器侧面装有流量调节旋钮，用于调节采样流量。主要技术指标：（1）采样流量：5~30L/min（2）负载能力：在采样器入口附加1500pa阻力时，流量不<20L/min（3）流量精度：2.5级（4）工作流量稳定性：≤5%（5）工作噪声：≤75dB（6）连续工作时间：120min（直流）（7）定时采样：999分钟内任意设定（交流）（8）工作环境：温度-10℃~40℃，相对湿度<90%（9）工作电压：DC：11VAC:220±10V（10）工作电源：可充式锂电池组：NIM4AH×1块（11）外型尺寸：（230×205×120）mm（12）重量：3.6kg三、使用方法1、使用前准备：按下仪器背后的直流开关，查看电压指示条形码，（条形码为五格）如果只剩Z后一格微亮，则蓄电池需充电。2、充电：该仪器设定充电时间为7小时，插上电源插头，按下背板直流开关，面板电压指标条形码亮，然后再按下面板充电按钮，充电指示灯亮充电开始，同时数码管面板显示充电时间420分钟，充电时间设置为。数码管显示全部为零，充电指示灯熄，充电完毕。充电期间中途停电，不论时间长短，来电后会继续充电。充电期间如需仪器工作，则按复位键即可。充电过程中，条形码应全亮，若不亮则充电失灵，须排除故障后再充。3、采样：（1）采样时，展开“三脚架”将仪器主机置于其上面，旋紧“三角架”上固定螺钉。其高度在0.7~1.7m之内可根据需要进行调节，以操作者平视“转子流量计”刻度为Z宜。（2）将2个“采样头”装好采样滤膜，安装在背板两个“采样头座”上，旋紧即可。（3）流量调节，首先要设置流量调节，时间1分钟。打开背板直流开关，电机瞬时启动，待“数码管”全部为零停止时，按“加”键，使“数码管”为1，然后按“采样”键，泵开始工作，旋开“流量调节阀”，将流量调到所需流量，亦可用流量调节阀进行微调，调节仪器侧面流量调节旋钮，到1分钟后，会自动停机。（4）设置，按下“加”键不松开，直到调到所需时间为止，松开即停。（5）按下“采样”键，采样开始，直到设置采样时间下降为零时，采样自动停止。中途如需停止采样，再次将“采样”键按下即可停止。四、及排除方法：故障现象故障原因排除方法电机不转（即开机后无工作声）1、保险烧断或保险接触不良。2、放电后锂电池本身对电池进行了保护。3、机械传动部位卡死。4、仪器电源开路1、更换保险管。2、用稳压电源从11V开始缓慢上调，发现电流表指针突然摆，证明电源已经打开。3、打开仪器排除卡死部位。4、找出开路原因接通电源。仪器工作但无流量显示1、机内胶管成死角2、机内胶管脱落1、排除死角。2、接通胶管。仪器工作时流量过低1、电源电压过低。2、橡皮管连接处有漏气现象。1、重新充电。2、找出漏气部位排除漏气或更换橡胶管。五、注意事项：1、仪器是不防爆型，切勿在有爆炸危险的场所使用。2、仪器在不采样时，请不要随意开动仪器以防止大气中的杂物吸入仪器内，造成杂物把抽气泵泵膜阻搁，不能正常工作。3、仪器工作环境为－10OC~45OC装箱单1、双头粉尘采样器一台2、三角架一付3、电源线一付4、采样头二个5、滤膜纸一盒6、1.保险一个7、使用说明书一份8、产品合格证一份9、滤膜夹盒四套[详细]

  2024-09-13 10:59

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