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高效液相色谱法测肌醇含量
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GX液相色谱法测肌醇含量
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高效液相色谱法测肌醇含量
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2018-09-30 10:00
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2018-09-30 10:00
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细菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法(HPLC)
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2018-11-08 10:00
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2024-10-01 06:06
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细胞ATPADPAMP含量高效液相色谱法定量检测试剂盒
- 主要用途大鼠心肌细胞ATP/ADP/AMP含量GX液相色谱法定量检测试剂盒是一种旨在通过高氯酸酸性处理,碱性中和后,在GX液相色谱仪和紫外光度仪下(254nm波长)检测分析,分离出ATP、ADP或AMP波峰,以定量测定样品中腺嘌呤核苷酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物或人体纯化线粒体样品中ATP、ADP、AMP的含量检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。技术背景腺嘌呤核苷酸(adeninenucleotides),简称腺苷,包括单磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷,是一种单体单位,为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)的组成成分,并提供化学能量,在能量代谢通路中维护诸如肌肉、胞膜等组织细胞结构的生化和生理功能,调节细胞糖酵解、三羧酸循环、电子传递系统、氧化磷酸化活动。腺嘌呤核苷酸在细胞中浓度低,且不稳定,通常通过其类型不同、浓度差异、分布状况,来评价细胞的代谢情况和能量状态。单磷酸腺苷(Adenosinemonophosphate;AMP),又称为5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸(5'-adenylicacid),是一种在(脱氧)核糖核酸中发现的核苷酸。它是一种磷酸及核苷腺苷的酯,并由磷酸基团、戊糖核酸糖及碱基腺嘌呤所组成。分子式为C10H14N5O7P,分子量347。AMP可以通过腺苷酸激酶(adenylatekinase)催化2分子ADP生成,或通过ATP以及ADP水解产生。AMP常以腺苷-3',5'-环化一磷酸(cAMP)形式存在于细胞中。AMP与ATP之比反映细胞ATP生成状况以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷(adenosinediphosphate;ADP),参与ADP-ATP循环,提供热能转换和动态平衡,尤其在线粒体需氧呼吸、光合成等实现。三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate;ATP)存在于所有代谢活跃的细胞内,是细胞活力的标志。一旦细胞凋亡或坏死,ATP浓度急遽下降。通过高氯酸酸性处理,排除蛋白质干扰,碱性中和后,在GX液相色谱仪和紫外光度仪下(254nm波长)检测分析,分离出ATP、ADP、AMP波峰,以定量其含量。产品内容清理液(ReagentA)100毫升裂解液(ReagentB)100毫升酸性液(ReagentC)5毫升中和液(ReagentD)1毫升流相液A(ReagentE)500毫升流相液B(ReagentF)500毫升标准液(ReagentG)500微升产品说明书1份[详细]
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- 牛肌醇(inositol)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。实验原理牛肌醇(inositol)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛肌醇(inositol)水平。用纯化的牛肌醇(inositol)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌醇(inositol),再与HRP标记的肌醇(inositol)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的肌醇(inositol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛肌醇(inositol)浓度。牛肌醇(inositol)ELISA试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(600pg/ml)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。牛肌醇(inositol)ELISA试剂盒操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。300pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液150pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液75pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液37.5pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液18.75pg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。牛肌醇(inositol)ELISA试剂盒注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。牛肌醇(inositol)ELISA试剂盒保存条件及有效期1.试剂盒保存:2-8℃。2.有效期:6个月[详细]
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2018-11-22 10:00
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