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C-肽ELISA试剂盒

本文由 深圳市科润达生物工程有限公司 整理汇编

2018-11-14 10:00 308阅读次数

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Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4C-肽ELISA试剂盒(德国DRG:EIA-1293)1、DRG公司C-肽ELISA试剂盒的临床应用1)接受了胰岛素ZL的糖尿病患者剩余β-细胞的功能评价。2)I型糖尿病患者缓解阶段的检测与监控。3)作为I型糖尿病(胰岛素依赖性)和II型糖尿病(非胰岛素依赖性)鉴别诊断的辅助工具。4)胰岛素引起的假低血糖症的诊断。5)辅助胰岛素瘤的诊断。(胰岛素YZ实验)6)用于检测糖尿病孕妇妊娠成功的预后指数。7)肝病患者胰岛素分泌的评价。8)切除术的监测。2、实验原理DRG公司C-肽ELISA试剂盒是以竞争原理为基础。样品中存在的未知含量的C-肽和已知浓度的C-肽酶联结物相互竞争结合到小鼠抗C-肽抗血清的结合位点。再与包被在检测孔上的抗小鼠抗体结合。没有结合的酶复合物被冲洗下来。加入底物溶液后,样本中的C-肽浓度和测得的光密度成反比例。3、试剂盒组成1)微孔反应板,96(孔),包被孔中包被了抗小鼠抗体。2)酶联结物,14ml。即用型,内含C-肽生物素标记物和稳定缓冲液。3)酶复合物,14ml,即用型,内含辣根过氧化物酶4)标准品系列(0-5),0-16ng/ml(具体浓度请见试剂瓶标签)。冻干粉,6支,用前加蒸馏水0.75mL。5)样品稀释液,3ml,即用型。6)抗血清:小鼠抗C-肽单克隆抗体,1支,7mL。7)底物液,TMB,14ml8)终止液,0.5M的H2SO4,14ml。9)浓缩冼涤液,40倍浓缩,30ml。4、实验所需器材但试剂盒不提供1)酶标仪2)移液器,100;200和1000μl3)标准冰箱4)吸水纸5)去离子水5、贮存条件当贮存在28℃下,未打开的试剂在有效期内均有效。不要使用过期试剂。半标准品配制好后,所有剩余的标准品必须冷藏于28℃的环境下。要更长时间的贮存,可将重新配制好的标准品冻存于-20℃的环境下。C-肽生物素联结物、酶复合物、底物溶液、洗涤液和零标准品必须冷藏于28℃的环境下。微孔反应板也必须冷藏于28℃的环境下。一旦包装袋拆开,必须将它重新密封好。6、样本的采集和准备血清:静脉穿刺采集全血,待其凝血,在室温下离心分离血清。未完全凝血前请勿离心,接受了抗凝剂ZL的病人样品可能需要更长的凝血时间。样本在2~8℃下能存储24小时,如果需要储存更长时间则需要在20℃下冻存,并且只能冻融一次血浆:将全血采集到含有抗凝剂的离心管,采集后立即离心分离。样本在2~8℃下能存储24小时,如果需要储存更长时间则需要在20℃下冻存,并且只能冻融一次尿液:1)24小时内排泄出的尿液总量应收集和混合在单独的容器中。2)记录下尿液的总体积。3)充分混合样品。离心样本至澄清,在2~8℃下能储存36小时;如果要保存更长时间则需要在20℃下冻存,只能冻融一次。4)实验样本用样品稀释液按1:20进行稀释。7、试剂准备标准品:用0.75ml蒸馏水溶解冻干标准品。可以保持不动直至完全融化,然后通过轻轻的倒转充分混匀。重新标配的标准品在2~8℃能保存3天,如果需要保存更长时间则需要放置在20℃下冻存洗涤液:将30ml的浓缩洗涤液用去离子水1170ml稀释至1200ml。稀释后的洗涤液可在室温下稳定存放2周。8、实验步骤1)将所需数目的板条置于板架上。2)将100μlC肽标准品,和样本加到相应的检测孔中。3)各孔中加入50μl抗血清。4)各孔中加入100μl酶联结物。5)充分振荡混匀10秒钟。6)室温温育60min。7)弃去孔内反应液。8)用洗涤液洗板3次(每孔400μl)。末次在吸水纸上拍干反应板。9)在每微孔中加入100μl酶复合物。10)室温温育30分钟。11)弃去孔中的反应液。用洗涤液洗板3次(每孔400μl)。末次在吸水纸拍干反应板。12)以相同的时间间隔在每一微孔中加入100μl底物液。13)室温静置20分钟。14)以相同的时间间隔在每一微孔中加入100μl终止液以终止酶反应。15)在加完终止液后10分钟内在450±10nm处测OD值。9、结果计算可以使用任何一个能在450±10nm处测定吸光度值的酶标仪。按下述方法可求得每个样本血清的C肽含量值。1)在线性或半对数坐标纸上,以每个参考标准品的平均吸光度值(Y)对它们相应的浓度值(X,ng/ml)做一标准曲线。我们建议您用四参数作标准曲线。2)利用每个血清样本的平均吸光度值,通过从标准曲线上读取相应的C-肽值,如有必要,还乘上初始样本的稀释倍数,便可得知它们相应的浓度值。利用DRG公司的ELIZAMAT3000和回归程序可以读出数值,并通过使用四参数逻辑功能或立体回归得到计算机辅助的解释。期望值:血清、尿液中C肽的正常范围。建议每个实验室建立起自己的正常人C肽水平范围。用DRG公司的C肽酶联试剂盒检测正常男性和女性所得到的正常范围值罗列如下:样本数平均值±2个标准差空腹12小时后(血清)600.5-3.2ng/ml尿液1-200g/day此外,用6个空腹12个小时后的正常成人做葡萄糖测定。在空腹12小时后,抽取血清。接受测定的人跟着服用50-60克的葡萄糖,在30-45分钟后再抽取血清样本进行检测,结果发现C-肽水平增加了200-600%。本译文仅供参考,详情请以原文为准。ZGdu家总代理:深圳市科润达生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10号6层邮政编码:518067电话:0755-26814430,26680196传真:0755-26814431免费电话:800-8306296

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