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人Ⅰ型前胶原C末端肽elisa试剂盒使用方法
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本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T20pg/ml-480pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)水平。用纯化的人Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Ⅰ型前胶原C末端肽CICP),再与HRP标记的Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人Ⅰ型前胶原C末端肽(CICP)浓度。
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- 电话:021-6533363955229872网址:http://www.westang.com人I型前胶原C端肽(PICP)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人PICP单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的PICP与单抗结合,加入生物素化的抗人PICP,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,Z后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,PICP浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中PICP浓度。试剂盒组成(2-8℃保存)酶标板(CoatedWells)96孔酶标抗体工作液(EnzymeConjugate)12ml10×标本稀释液(SampleBuffer)12ml20×浓缩洗涤液(WashBuffer)50ml标准品(Standards):400ng/ml1瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗体工作液(BiotinylatedAntibody)12ml终止液(StopSolution)12ml准备试剂与收集血样1.收集标本:血清、血浆(EDTA、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。2.标准品液配制:设标准管7管,每管加入标本稀释液300ul。在**管中加入400ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第六管中吸出300ul弃去。第七管为空白对照。加上原液管总共八管。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)检测程序1.加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板:同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0ng/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应PICP含量。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的PICP检测浓度小于3ng/ml。2.特异性:可同时检测重组或天然的人PICP。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性:板内、板见变异系数均小于10%。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断![详细]
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