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FLIPR产品应用(1)药物研发早期阶段EarlyTox心肌毒性检测试剂盒的生物相关心肌毒性评价实验
本文由 美谷分子仪器(上海)有限公司 整理汇编
2021-02-22 13:36 435阅读次数
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在药物研发早期进行心急毒性评价是非常重要的,以便于排除潜在的有毒副作用的化合物,从而开展进一步的研究。高度预测性的生物相关性体外高通量筛选分析实验对于提GX率和降低心脏安全性评价失败的化合物筛选的高成本来说是至关重要的。
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FLIPR产品应用(1)药物研发早期阶段EarlyTox心肌毒性检测试剂盒的生物相关心肌毒性评价实验
在药物研发早期进行心急毒性评价是非常重要的,以便于排除潜在的有毒副作用的化合物,从而开展进一步的研究。高度预测性的生物相关性体外高通量筛选分析实验对于提GX率和降低心脏安全性评价失败的化合物筛选的高成本来说是至关重要的。[详细]
2021-02-22 13:36
应用文章
产品应用(2)诱导多能干细胞毒性实验
药物引起的组织毒性是候选药物未能进入市场的一个重要原因,因此,安全性和有效性试验的高度预测分析是提高药物开发和降低候选药物抗药性的关键。[详细]
2021-02-23 16:15
应用文章
大鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒
大鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒[详细]
2013-12-10 00:00
操作手册
小鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒
小鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒[详细]
2013-12-09 00:00
操作手册
人心肌营养素1(CT1)ELISA试剂盒
人心肌营养素1(CT1)ELISA试剂盒[详细]
2015-03-18 00:00
标准
JCI insight:BAG3伴侣复合物——维持蛋白毒性应激期间的心肌细胞功能
分子伴侣能够调节人类蛋白质组的质量控制,其中涉及许多疾病,包括心力衰竭。BAG3基因(编码共伴侣蛋白)的突变与遗传性和散发性扩张型心肌病引起的心力衰竭有关。家族性BAG3突变是常染色体显性的,经常导致编码序列的截短,引发杂合子功能丧失机制。然而BAG3基因杂合子敲除鼠并没有表现出可检测的疾病表型。为了在人类系统中建立BAG3心肌病模型,美国研究人员Luke M. Judge等利用人类诱导多能干细胞(iPSCs)产生了一系列BAG3功能缺失突变的心肌细胞(iPS-CMs)。BAG3突变杂合子降低了iPS-CMs的蛋白质表达,破坏了肌原纤维结构,损害了收缩功能。当暴露于已知会引起心脏毒性的蛋白酶体抑制剂时,BAG3缺陷的iPS-CMs对进一步的肌原纤维断裂和收缩功能障碍特别敏感。对内源性BAG3蛋白进行亲和标记和质谱蛋白质组学,进一步确定了人类心脏中BAG3协调的心脏保护伴侣复合物。Z后基于这些结果建立了一个模型,用于评估人心肌细胞中的蛋白质质量控制途径及其作为心脏药物毒性的治疗靶点和易感因素的潜力。[详细]
2024-09-28 04:03
应用文章
产品应用(17)在SpectraMax MiniMax 300细胞成像系统上应用 EarlyTox细胞完整性试剂盒检测细胞活性或毒性
该试剂盒设计工作于多种细胞类型,贴壁和悬浮均可。简单的操作流程和优异的试剂表现使其能应用到高通量扫描上。[详细]
2024-09-11 18:18
应用文章
FLIPR产品应用(10)专注药物研发,20年铸就经典
我们的FLIPR® Tetra高通量实时荧光检测分析系统是快速、可靠且便捷的药物研发利器。系统可进行荧光和化学发光检测,且配有96-、384-和1536孔等多种通量可供选择以适用于您不同模式的实验需求。[详细]
2021-02-22 13:42
应用文章
鸡心肌肌钙蛋白ELISA 检测试剂盒
鸡心肌肌钙蛋白(cTn-I)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理:鸡心肌肌钙蛋白ELISA检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知cTn-I浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将cTn-I和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中cTn-I的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品:80ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀释缓冲液1瓶(4.0ml)1瓶(2.0ml)即用型生物素标记的抗cTn-I抗体1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型亲和链酶素-HRP1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)即用型洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自备材料1.蒸馏水。2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振荡器及磁力搅拌器等。安全性1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1.鸡心肌肌钙蛋白ELISA检测试剂盒应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液5、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1.标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:80ng/ml(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。40ng/ml(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液20ng/ml(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液10ng/ml(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液5.0ng/ml(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液2.5ng/ml(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0ng/ml(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。操作步骤1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。5.每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。9.在450nm波长处测定各孔的OD值。局限6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性:不与其它细胞因子反应。3.重复性:板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的cTn-I标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的cTn-I含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围:0-80ng/ml4、敏感度:0.1ng/ml[详细]
2018-11-04 10:00
产品样册
大鼠心肌营养素-1(CT-1)ELISA试剂盒说明书
电话:021-6533363955229872网址:http://www.westang.com大鼠心肌营养素-1(CT-1)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗大鼠CT-1(Cardiotrophin-1)单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的CT-1与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠CT-1,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,Z后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,CT-1浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中CT-1浓度。试剂盒组成(2-8℃保存)酶标板(CoatedWells)96孔酶标抗体工作液(EnzymeConjugate)12ml10×标本稀释液(SampleBuffer)12ml20×浓缩洗涤液(WashBuffer)50ml标准品(Standards):1ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗体工作液(BiotinylatedAntibody)12ml终止液(StopSolution)12ml准备试剂与收集血样1.收集标本:血清、血浆(EDTA抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。2.标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,配成2000pg/ml的溶液。设标准管8管,每管加入标本稀释液300ul。在**管中加入2000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)检测程序1.加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板:同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应CT-1含量。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的CT-1检测浓度小于10pg/ml。2.特异性:可同时检测重组或天然的大鼠CT-1。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性:板内、板见变异系数均小于12%。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断![详细]
2018-09-13 10:00
产品样册
人心肌营养素-1(CT-1)ELISA试剂盒说明书
人心肌营养素-1(CT-1)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人CT-1(Cardiotrophin-1)单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的CT-1与单抗结合,加入生物素化的抗人CT-1,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,Z后加终止液,在450nm处测OD值,CT-1浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中CT-1浓度。试剂盒组成(2-8℃保存)酶标板(CoatedWells)96孔酶标抗体工作液(EnzymeConjugate)12ml10×标本稀释液(SampleBuffer)12ml20×浓缩洗涤液(WashBuffer)50ml标准品(Standards):2ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗体工作液(BiotinylatedAntibody)12ml终止液(StopSolution)12ml准备试剂与收集血样1.收集标本:血清、血浆(EDTA抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。2.标准品液配制:使用前加入1ml蒸馏水混匀,配成2000pg/ml的溶液。设标准管8管,每管加入标本稀释液300ul。在**管中加入2000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)检测程序1.加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板:同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应CT-1含量。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的CT-1检测浓度小于10pg/ml。2.特异性:可同时检测重组或天然的人CT-1。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性:板内、板见变异系数均小于12%。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断![详细]
2018-09-13 10:01
产品样册
人抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒
人抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒[详细]
2015-03-12 00:00
期刊论文
产品应用(3)高通量筛选神经毒性
神经系统对许多毒性化合物以及自然环境中生成的有害物质非常敏感。在疾病发生过程中,神经毒性可以对大脑或者外周神经系统造成短暂或持续性的损伤,例如脊髓损伤,中风,创伤性脑损伤等。同时这种神经毒性也是造成很多神经退行性疾病诸如阿尔兹海默和帕金森的主要诱因。[详细]
2021-02-19 13:44
应用文章
免疫荧光实验iPSC-derive神经元的体外神经毒性检测
免疫荧光实验iPSC-derive神经元的体外神经毒性检测[详细]
2016-06-16 00:00
专利
小鼠心肌转录因子GATA3 检测试剂盒说明
小鼠心肌转录因子GATA3检测试剂盒说明书该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)为基础,可用于检测血液,细胞、组织内的特异性CD40抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD40一抗与相应靶抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物,显微镜下观察成像。小鼠心肌转录因子GATA3检测试剂盒所含试剂:试剂A通透液:0.1%Triton-X10010mL(选用)试剂B封闭缓冲液(封闭用)20mL试剂C(原装进口分装)已稀释的即用型CD40一抗(2.5ml)试剂D(原装进口分装)生物素化羊抗兔IgG1支(浓度1.5mg/mL,稀释比为1:300~1:500)50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支(浓度1μM,稀释比1:50~1:200)100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL,浓盐酸调pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%体积比)2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL,浓盐酸调pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修复液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g加蒸馏水700mL,用10mMNaOH调pH值至8.0,Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤(建议方案):石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片:将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1hr;2.脱蜡:切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修复:根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗涤(2×2min)(具体修法见附1)*注:有些抗原勿需修复,直接进入第5步封闭。5.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育30min;6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2hr7.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);8.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育30min;10.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);11.封闭:滴加试剂Tween20,37℃湿盒孵育封闭20min;12.加HRP-SA:滴加用试剂C稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20nM),37℃湿盒中孵育30min;13.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min),TBS洗涤(2×5min);14.显色:应用DAB溶液(试剂F)显色;15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;16.封片:待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;17.观察成像:显微镜下观察成像。原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物,显微镜下观察成像。小鼠心肌转录因子GATA3检测试剂盒注意事项:1.修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween20,否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1:抗原修法常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修复液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修复法酶消化修复切片脱蜡水化处理,TBS冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或继续微波10~15min,取出微波盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时4~8min即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]
2018-10-09 10:00
产品样册
兔(Rabbit)心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测试剂盒
兔(Rabbit)心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测试剂盒本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆试验原理:cTnI试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知cTnI浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将cTnI和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中cTnI的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品:8.0ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素标记的抗cTnI抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型自备材料蒸馏水。加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:8.0ng/ml(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。4.0ng/ml(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液2.0ng/ml(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液1.0ng/ml(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液0.5ng/ml(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液0.25ng/ml(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0ng/ml(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。操作步骤使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度(ng/ml)A8.08.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B4.04.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C2.02.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D1.01.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E0.50.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F0.250.25样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性:不与人其它细胞因子反应。3.重复性:板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的cTnI标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的cTnI含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围:0-8.0ng/ml4、敏感度:0.01ng/ml[详细]
2018-10-31 10:00
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心肌缺血预适应的生物学机制
心肌缺血预适应的生物学机制[详细]
2024-09-28 23:18
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兔心肌肌钙蛋白(cTn-)ELISA试剂盒
兔心肌肌钙蛋白(cTn-)ELISA试剂盒[详细]
2013-12-13 00:00
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大鼠心肌转录因子ELISA试剂盒
大鼠心肌转录因子ELISA试剂盒ELISA试剂盒价格|厂家促销ELISA试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。大鼠心肌转录因子GATA4ELISA试剂盒由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。中文名称:ELISA试剂盒货号:YM-2614B规格:96T/48T保质期:6个月,所有试剂盒均提供Zxin批次。试剂盒成分:酶标板,试剂,标准品等。种属:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。ELISA试剂盒实验操作步骤包括:从包被,封闭,加样,洗涤,加显色底物,终止液加入,到读书操作,还有标准曲线制作等详尽的操作说明。用途:用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中大鼠心肌转录因子GATA4ELISA试剂盒的含量。ELISA试剂盒使用优点:ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白,包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。灵敏,准确和一致的性能用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证在半天内可完成的现成,方便的[详细]
2018-09-14 10:00
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小鼠心肌肌钙蛋白(cTn-)ELISA试剂盒
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2024-09-28 15:43
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