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小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)说明书

本文由 上海科学仪器有限公司 整理汇编

2018-10-23 10:30 237阅读次数

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小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)说明书本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。用纯化的小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)浓度。小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)说明书酶标包被板1×481×96标准品:72μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)说明书本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量。操作步骤标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在**、第二孔中分别加标准品100μl,然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为48μg/L,32μg/L,16μg/L,8μg/L,4μg/L)。加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)说明书

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