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ELISA试剂盒具体操作流程

本文由 上海盈公生物技术有限公司 整理汇编

2018-09-27 10:00 785阅读次数

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ELISA试剂盒操作事宜如下:1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。2、酶标板置4℃。3、洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。4、阴性对照孔每孔加入PBS50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。6、洗板,同4。7、每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。9、洗板,同(4)。10、每孔加TMB显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。11、每孔加100μl2mol/LH2SO4终止反应。12、分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,Z终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。ELISA试剂盒13、数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。注:所用溶液配方(1)PBS:称取0.2gKH2P04,2.9gNa2HP04?12H20、8.0gNaCl,0.2gKCl,加双蒸水至1000ml。(2)包被缓冲液:称取1.59gNa2CO3,2.938NaHCO3,加双蒸水至1000m1。(3)洗涤液(PBST):含0.05%Tween-20的PBS。(4)稀释液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,主要用以稀释抗体、标准品、样品。(5)TMB显色液:称取1.84gNa2HP04.12H20,0.51g柠檬酸,加双蒸水至1O0ml,配成柠檬酸-磷酸缓冲溶液。用10.5ml柠檬酸-磷酸缓冲溶液溶解1锭TMB,再加入35μl3%H2O2(6)细胞裂解液:1%TritonX-100,137mmol/LNaCl,20mmol/LTris-HCl,2mmol/LEDTA,1mmol/LPMSF,pH7.4。(其中PMSF溶于异丙醇中,配成1Ommo/L,-20℃贮存备用。

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