分子杂交核酸探针的制备方法

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。

探针概念

一段带有检测标记已知的核苷酸序列，其和目的基因或者目的DNA特异互补。

制备方法

50-300bp通常为合适的长度，有时长度达到1.5kb。

1.化学合成

2.PCR扩增

3.DNA重组技术

分类

按照不同的性质和来源，探针包括以下几类：

1.寡核苷酸探针

2.RNA探针

3.cDNA探针

4.基因组DNA探针

核酸分子杂交方法

根据待测核酸是否在固相支持物上固定来分可以分为：

1.液相杂交

（1）核酸酶S1保护分析法

（2）RNA酶保护分析法

2.固相杂交

（1）原位杂交

（2）膜上印迹杂交

根据分子种类来分可以分为：

（1）Western印迹杂交

（2）Northern印迹杂交

（3）Southern印迹杂交

标记的种类

1.非同位素

荧光素、地 高 辛配体以及生物素等标记物

2.同位素

125I、3H、35S以及32P等标记探针

寡核苷酸探针合成的注意事项

1.如果和非靶序列有连续8个以上的相同碱基序列或者有超过百分之七十同源性，那么不用为好。

2.防止连续出现同一碱基

3.探针内防止互补

4.G:C对含量Z好在百分之四十到百分之六十之间。

5.长度Z好在10到50bp之间。