细胞培养的注意事项

细胞培养指的是在体外模拟体内的环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），让它生存、生长、繁殖并且能够维持主要的结构和功能的一种方法。细胞培养在生物学中又叫做细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养技术可以通过一个细胞培养成为大量的单细胞或极少分化的多细胞，细胞培养技术是细胞生物学研究方法中及其重要和常见的技术，由细胞培养不仅能够获取大量细胞，还能够借此研究细胞其他的相关知识。

注意事项

（1）diyi次开始培养某种细胞时，需要了解该细胞的详细信息，包括需要使用的培养基、血清、添加剂、通常的消化时间、传代时间等

（2）进行细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：

①保证细胞操作用的所有溶液和耗材都已经经过消毒和检测，不要使用不确定的溶液和耗材，除非情况特殊，不然不能够用别人的溶液。

②卷起衣服的袖口和扎紧白大褂的袖口。

③保证酒精灯内的酒精量充足，如果不够，要及时补充

④保证把所有需要用到的溶液和耗材放在方便拿到的位置。实验开始前把所有瓶盖旋松，方便单手开启瓶盖。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，如果溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）然后在火焰上烧灼。

⑥操作时需要确保所用的耗材都是洁净的。

⑦实验完成后要及时清理垃圾，维持工作区域清洁整齐。

（3）预防细胞污染

①要防止实验用品被污染。要彻底清洗、消毒细胞培养所用试剂、耗材、器材，各种溶液要认真灭菌，且在无菌实验检测阴性后方可以使用。要定期清洁、消毒、灭菌操作室及剩余的无菌器材。

②操作的过程要预防被污染。

③进入细胞间要穿着白大褂，不能穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物。

④实验前需要检查佩戴的手套，保证没有问题，不能要接触过生物安全柜之外的物品，，如果接触过，就必须对手套进行消毒。

⑤为了不影响生物安全柜的风帘，在进入细胞间后要关好门，尽量不要走动。实验开始前，手和瓶盖需要用75%酒精棉球擦拭消毒。为了避免对细胞造成污染，那么实验所需的器材、溶液和细胞要严格的进行检查。不能把没有消毒的物品带进无菌室，更加不能使用未经消毒的物品。

⑥细胞操作时动作要轻，打开瓶口必须在火焰周围无菌的位置，把瓶口放在火焰周围简单转动烧灼。

⑦在实验的时候要尽量放低生物安全柜的隔板，不要对着工作区打喷嚏或咳嗽，尽量不要说话。

⑧为了防止瓶盖被误操作所污染，瓶盖需要倒放在离自己较远的地方。

⑨为了防止衣服上掉落不明物体对细胞的污染，尽量不要从敞开的容器口上方经过。

⑩实验操作时要注意巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管应该及时更换，。如果发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品就必须直接丢弃。实验完毕后需要及时收拾，保持实验室清洁整齐，Z后用75%酒精清洁台面。

（4）防止细胞交叉污染

①在进行多种细胞培养操作时，为了方便辨认实验所用的器具，Z好在器具上做好标记，严格区分。Z好不要多种细胞多种操作一起进行以免发生混乱，Z好一次一次只处理一种细胞，按顺序进行操作

②在进行换液或传代操作时，不要让粘有细胞的移液枪头和移液管和试剂瓶瓶口接触，防止把细胞带到培养基中污染其他细胞。

③所有细胞一旦购置必须及时冻存，如果发生污染必须重新复苏细胞，继续培养。