液相色谱串联质谱仪校准规程

液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS）校准核心规程与技术要点

在分析化学与生命科学领域，液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS）凭借其极高的灵敏度与特异性，早已成为实验室定量与定性分析的“金标准”。由于其构造复杂、精密组件多，仪器的长期稳定性受真空度、环境温度及离子源污染等多种因素影响。为了确保检测数据的溯源性与真实性，建立一套标准化的校准规程不仅是合规性的要求，更是检测的前提。

校准前置条件与性能确认

在开启正式校准流程前，环境条件的控制至关重要。实验室温度应稳定在18-27℃，湿度保持在20%-80%之间，且需配备UPS稳压电源以消除电波动对质谱射频电压的影响。

性能确认阶段需关注离子源（ESI/APCI）的洁净程度。对于长期运行的仪器，机械泵油的液位及颜色、分子泵的工作电流以及真空度（通常需优于5×10^-5 Torr）必须处于正常阈值。若基础性能未达标，强行校准 mass axis 往往会导致后续分析的质量偏差。

关键技术指标与评价标准

质量轴校正与质谱优化流程

1. 质量轴校准（Mass Calibration）

这是校准的核心环节。通常采用注射泵注入标准校准液（如聚二醇PPGs、利血平或定制混合物）。通过调整质量分析器（Q1/Q3）的电压参数，确保已知特征离子的观测值与理论值完全匹配。对于高分辨质谱（如Orbitrap或Q-TOF），校准精度需达到ppm级别。

2. 质谱分辨率调整

调整Q1与Q3的偏移电压（Offset）和增益（Gain），使特征离子的半峰宽稳定在0.7 amu。分辨率过高会牺牲灵敏度，过低则导致质量重叠与背景噪音增加。操作者通常会在此处寻找“甜点区”，即平衡响应值与峰形对称性的佳点。

3. 检测器增益调节

电子倍增器（EM）或光电倍增管随使用时间增长会出现衰减。通过调节高压，确保检测器对单离子碰撞的信号放大倍数处于线性响应区间。

联用系统的整体校验

单独质谱部分的校准并不代表联用系统的完整性。在LC-MS/MS规程中，必须加入液相部分的联动考量。

• 梯度洗脱重复性：通过多组分混合标准品的保留时间（RT）漂移来评估，RT的RSD通常不应超过1.0%。
• 交叉污染（Carry-over）：在高浓度样进样后紧随一针空白溶剂，考察是否有残余信号，这对于高灵敏度定量分析至关重要。
• 离子源参数优化：针对特定目标物，需对喷雾电压、辅助气（Gas1/Gas2）流量及离子传输管温度进行动态优化，以获得最佳去溶剂化效率。

运维建议与结论

在实际工作中，建议实验室建立“日检查、周确认、月校准”的梯度维护机制。每日观察质谱基线噪音水平；每周运行一次系统稳定性测试（SST）；每月进行一次完整的质量校准。

规范的校准流程不仅能显著降低实验数据的假阳性或假阴性风险，更能延长分子泵、检测器等高价值耗材的使用寿命。在追求科研数据的道路上，校准规程的严谨执行是实验室质量体系的核心基石。