琼脂糖凝胶电泳步骤

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

琼脂糖凝胶电泳步骤

1.缓冲液的制备

（1）TAE或者TBE为常用的缓冲液，PH值在6-9之间。

（2）不管是TAE或者TBE均含有EDTA，其能够将二价金属离子去除。

2.琼脂糖胶板的制备

（1）在三角瓶中放入一定量的琼脂糖，将电泳缓冲液加入其中，使一定浓度的琼脂糖溶液（PCR产物：1.2％；基因组DNA：0.8％）配制完成。

（2）在制胶架上插上选好的梳子，在制胶架中放入选好的凝胶盘。

（3）将溶液加热煮沸澄清，冷却到60摄氏度将10毫克/毫升EB加入其中，摇匀后往制胶架中倒入。

（4）放置在室温环境中30-40min等到凝胶聚合后，将梳子轻轻拔掉（注意：先拔一侧，不然垂直拔除产生真空造成部分凝胶带出）。

3.将电泳缓冲液加入到两边的槽中，使得凝胶被全部浸没，液面应该比胶面高1毫米。

4.在梳井内加样，注意预防气泡被引入。

5.将上盖盖好，将电泳仪接通。

6.电压需要按照实际情况来选择比较合适的。长胶需要比较高的电压，然而高电压会缩短电泳的时间，发热高，分辨率低，其对于样品的筛选或者样品纯度的检查很适合。相反，电压低，发热少，分辨率比较高，然而耗费时间长。

7.在完成电泳实验后，应当首先将电泳仪关闭，然后将电源线拔除，再将电泳槽上盖打开，将凝胶托盘取出来。