细胞培养的过程

细胞培养指的是在体外模拟体内的环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），让它生存、生长、繁殖并且能够维持主要的结构和功能的一种方法。细胞培养在生物学中又叫做细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养技术可以通过一个细胞培养成为大量的单细胞或极少分化的多细胞，细胞培养技术是细胞生物学研究方法中及其重要和常见的技术，由细胞培养不仅能够获取大量细胞，还能够借此研究细胞其他的相关知识。

一、准备工作

准备工作包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试这些内容。准备工作中的疏漏可能造成实验的失败，所以对于细胞培养来说，准备工作尤为的重要，需要认真的对待。

二、取材

根据实验的目的，在无菌的环境中从机体中获取某种组织细胞，通过消化分散细胞、分离等处理后接入到培养器皿中。这个过程被叫做取材。细胞株的扩大培养没有取材这一过程。原代培养是指对机体中取出的组织细胞的diyi次培养。

理论上人和动物体内的任何组织都能够被培养，相较于成年个体的组织，幼体组织（尤其是胚胎组织）更容易被培养。相比幼体组织（尤其是胚胎组织），分化程度高的组织更容易被培养。相较于正常组织，肿瘤组织更容易被培养。取材后必须马上进行处理，立刻进行培养，如果不能立刻培养，需要将组织块切成黄豆大小的小块，保存到4℃的培养液里。取组织时要维持无菌的状态，而且要防止和有害的物质接触。有些组织细胞获取时非常容易带菌。所以可以使用KJ素处理细菌以避免细胞受到污染。

三、培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

四、冻存和复苏

保存细胞，尤其是很难获得的细胞株或者突变型细胞，需要把细胞冷冻保存。通常用液氮冷冻保存细胞。液氮的温度为零下196℃。把加入了保护剂（通常是二甲亚砜或甘油）细胞放入到冻存管中，通过一定的冷却速度冻存。如果冻存的温度足够低，那么细胞保存的时间会很久很久。细胞的复苏一般采用速融的方法，也就是从液氮中取出冻存管，然后马上放到37℃的水中，让它在很短的时间里快速溶解，再然后把细胞放入到培养皿中进行培养，细胞的活力和冻存过程中选择的保护剂，细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都有关联。