紫外可见光分光光度计使用步骤

紫外可见光分光光度计的标准操作规程与核心参数解析

在分子光谱分析领域，紫外可见光分光光度计（UV-Vis）凭借其高灵敏度和宽泛的应用范围，始终是实验室定量分析的核心工具。无论是生物大分子的浓度测定，还是工业化工品的纯度检验，规范化的操作流程与对关键技术参数的深度掌握，都是确保检测数据真实性、重复性的前提。

操作前置：光源预热与系统自检

UV-Vis 的核心组件包括氘灯（紫外区）和钨灯（可见区）。开机后，仪器必须经历 20-30 分钟的预热期。这一步骤并非可有可无，而是为了让光源的热发射达到平衡状态，从而有效基线漂移（Baseline Drift）。

在预热的现代仪器通常会执行系统自检（Initialization），核查波长准确度（Wavelength Accuracy）和滤光片位置。操作者会在此阶段观察能量监测数据，若 656.1nm（氘灯特征谱线）的峰值能量明显下降，则需考虑光源寿命是否接近终点。

参数设定：构建优化的检测环境

在进入样品测量前，需根据被测物的光谱特性设定合理的参数。这不仅是点击软件界面，更是对分析化学逻辑的实践：

1. 波长选择：通常选择最大吸收波长（$\lambda_{max}$），以获得最高的检测灵敏度并减小比尔定律的偏离。
2. 光谱带宽（SBW）：这是衡量仪器分辨率的关键。对于复杂组分，较小的带宽可提高分辨率；而对于宽吸收峰样品，适当放大带宽可提升信噪比。
3. 扫描速度：进行全波段扫描时，应选择中速或慢速，避免因探测器响应延迟导致的谱峰位移。

核心步骤：校准、归零与比色皿维护

空白校准（Blanking）是消除溶剂和比色皿背景吸收的必要手段。使用双光束仪器时，参比池与样品池需保持介质的一致性。

关于比色皿的操作，行业经验总结如下：

• 材质匹配：200-340nm 波段必须使用石英比色皿，普通玻璃或塑料比色皿在紫外区有强吸收，严禁混用。
• 手持规范：仅接触比色皿的毛面，严禁触摸光学通光面。任何指纹油污都会引起显著的光散射。
• 对准标记：比色皿通常刻有标识，每次放入比色池时方向必须一致，以抵消玻璃厚度不均带来的光程误差。

关键技术指标参考列表

测量实施与数据获取

在测量循环中，应先进行吸光度归零（Zeroing）。样品倒入比色皿至 2/3 处，避免产生气泡或悬浮物，这些物理因素会造成入射光的漫反射。若吸光度读数超过 1.5 Abs，建议对样品进行适度稀释，因为在此高浓度区间，光强与浓度之间的线性关系（比尔定律）往往会因分子间相互作用而失效。

维护与停机规范

实验结束后的收尾工作直接影响仪器的使用寿命。比色皿应及时用去离子水或专用清洗剂冲洗，防止被测物附着造成“记忆效应”。

在停机前，人员习惯检查耗材计时器。通常，氘灯的使用寿命在 1000-2000 小时左右。记录下当日的运行状态，特别是基线噪声是否有异常增大，是实验室质量管理体系（ISO/IEC 17025）中对仪器维护的基本要求。

通过严格遵循上述规程，实验人员不仅能获得高质量的科研数据，更能通过对光路系统的微调与状态监控，延长精密仪器的服役周期。