酶免检测抗体的方法

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

一、捕获法

血清中同时存在针对某些抗原的特异性lgM和特异性lgG，lgG会对lgM抗体的测定产生干扰。所以，在多数情况下对lgM抗体的测定使用捕获法，先在固相上固定所有血清lgM，在将lgG去除之后，再对特异性lgM进行测定。

操作步骤

1.在固相载体上连接抗原lgM抗体，使得固相抗体lgM形成。

2.将稀释的血清标本加入，保温反应后，固相抗体捕获血清中的lgM抗体，洗涤，将其他免疫蛋白和血清中的杂质成分去除。

3.将特异性抗原试剂加入，它仅和固相上的特异性lgM结合，洗涤。

4.将针对特异性的酶标抗体加入，让其和结合在固相上的抗原反应结合，洗涤。

5.将底物加入显色，如果显示颜色，就表面血清标本中存在特异性的lgM抗体

二、间接法

间接法是检测抗体Z常用的方法，原理是和固相结合的受检抗体通过酶标记的抗体来检测。

1.连接固相载体和特异性抗原，使固相抗原形成，将没有结合的抗原和杂质除去。

2.将稀释的受检血清加入，血清当中的特异抗体和抗原相结合，使固相抗原抗体复合物形成。在洗涤之后，只有特异性抗体留在固相载体上，因为其他免疫蛋白和血清中的杂质不能够结合固相抗原从而被清洗除去。

3.将酶标抗体加入，和固相复合物中的抗体结合，从而使得酶间接性记在该抗体上。洗涤后，特异性抗体的量就为固相载体上的酶量。

4.将底物加入显色。标本中受检抗体的量通过颜色的深度来显示。

三、双抗原夹心法

这种方法能够对各类抗体进行检测，所以，和间接法相比，双抗原夹心法的灵敏度和特异性要更加的高。它的原理和双抗体夹心法类似，也有大体上相同的操作步骤，一步法也可以使用，不过因为机体产生的抗体lgG的效果有限，通常钩状效应不会出现。