ELISA法原理、特点和分类

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

基本原理

采用抗原与抗体的特异反应连接特异反应将待测物与酶，之后通过底物和酶发生颜色反应，从而用来定量测定。测定的对象既可以是抗体又可以是抗原。

在这种测定的方法中包括酶作用的底物（显色剂）、固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）以及酶标记的抗原或抗体（标记物）3种必要的试剂。

在测量的时候，首先在固相载体上结合抗原（抗体），然而它的免疫活性仍然会保留。之后将一种抗体（抗原）与酶结合，使得偶联物（标记物）形成，它的原来的酶活性和免疫活性依然保留。当固相载体上的抗原（抗体）和偶联物结合后，再和酶的相应底物反应而显色。

其所生成的颜色深浅和欲测的抗原（抗体）含量正相关。可以使用肉眼、光学显微镜、电子显微镜对这种有色产物进行观察，也可以使用分光光度计测定这种有色产物。它具有简单快速的操作和很强的特异性。

特点

特异性强

抗体或抗原的选择性是其特异性的来源。实质上，只在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间发生抗原抗体的结合。因为在化学结构和空间构型上两者呈互补关系，因此抗原抗体反应的特异性非常的高。

灵敏性高

作为报告基团的酶为该测定法的灵敏度的来源。大家都知道，酶是一种有机催化剂，大量的催化反应均可以通过很少量的酶就能够被诱导，从而使可供观察的显色反应现象产生。所以该体系通常被叫做酶放大体系。ELISA使得细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量实现了。

分类

该法由种类和变化可分为以下几种：

（一）双位点一步法

（二）捕获法测IgM抗体

（三）应用亲和素和生物素的ELISA

（四）双抗体夹心法

（五）间接法

（六）竞争法