ELISA法检测注意事项

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

洗板

1.浸泡的时间适当。

2.每孔加入洗液超过350微升，不溢孔，残留少于5微升.

3.洗板的次数按照说明书的要求。

4.避免洗板机堵孔。

显色

1.A液和B液应当尽可能不要和污染物接触。

2.不能将厂家不同，批次不同的酶显色液混用。

3.对底物溶液的有效性进行检查。

4.当试剂显色的时候，先将A液加入，再将B液加入，A液和B液的加入顺序不能颠倒。

终止和读数

1.在将终止液加完后，半个小时内对数据进行读取。

2.确保酶标板的底部清洁干燥。

3.设定正确的酶标仪临界值计算公式。

4.肉眼的判断不准确，会对结果产生影响。

5.酶标仪选择合适的波长。

结果判读

标本

1.保持血清新鲜，防止细菌污染。

2.如果血清在5日之内检测，那么可以保存在4摄氏度下，不然低温保存。

3.防止溶血、高脂学以及纤维蛋白凝块。

试剂

1.在使用试剂之前，先将检测试剂盒放在室温下平衡15-30min,使活性剂溶解和酶等液体的初始反应温度得到保证。

2.对外包装和内组分是否漏液进行检查。

3.试剂盒在2-8摄氏度下保存。

加样

1.需防止在孔壁上部添加。

2.加样速度不应过快。

3.不能够将样品溅出。

4.防止气泡产生。

5.加样器尽量使用同一个，枪头需装紧，加样后混合均匀。

6.加样器必须定期校准。

温育

1.温育应当选择合适的温度。

2.反应时间必须足够充分。

3.排除“边缘效应”。