ELISA法检测时显色淡，灵敏度偏低及重复性差的原因和解决方法

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

问题：显色淡，灵敏度偏低

原因1：底物作用时间不足

解决方法：将时间延长到标准时间。

原因2：样品使用了叠氮钠防腐，使酶的活性受到YZ

解决方法：不可以使用NaN3对和酶一起加入的样样品进行防腐。

原因3：蒸馏水受到污染

解决方法：将受到污染的蒸馏水换成合格的去离子水和蒸馏水。

原因4：没有配置稀释比例合适的洗涤液，稀释的倍数高于1：20

解决方法：配置稀释比例合适的洗涤液。

原因5：试剂盒的运输时间过长，受到高温的影响

解决方法：在夏天长途运输的时候，将时间缩短，采取降低温度的方法。

原因6：试剂盒失效

解决方法：失效了的试剂不要使用。

原因7：试剂盒没有在室温下平衡

解决方法：在实验前，将检测试剂盒放置在室温下平衡至少半小时。

原因8：水浴箱温度没有达到37摄氏度

解决方法：将水浴箱的温度调节到37摄氏度，孵育的时候应当尽量少开门。

原因9：孵育时间不足

解决方法：将定时钟校准，使定时准确。

原因10：加入样品的数量偏少。

解决方法：将吸液器校准，紧密结合吸嘴和移液器，吸嘴保证一 次 性使用。

原因11：酶结合物加样量偏少

解决方法：瓶身应当垂直滴加，使液滴确保Zda。

问题：较差的重复性

原因：

1.孵育时间不同

2.洗涤条件不一致

3.操作人员不一致

4.样品的数量偏多，耗费过长的加样时间

5.加样量不同

解决方法：

对于标本重复进行测定，移液器尽量使用同一个，将吸嘴装紧，应当尽可能保持和上一次相同的条件和人员，从而使这些原因导致重复性差的可能性得以排除。