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毛细管电泳仪的使用注意事项和对其要求

类型:毛细管电泳仪 2019-06-25 17:15:02 1828阅读次数

毛细管电泳: 将高压直流电场当作驱动力,将弹性石英毛细管当作分离通道,以样品中各组分的淌度(单位电场强度下的迁移速度)和分配行为的不同作为依据来分离各组分的方法。


注意事项

在对CE 系统进行搭建时,需要仔细考虑以下几个关键部位:

1. 进样系统:

电迁移进样以及流体动力学进样为其比较常用的几种两种主要方式。动力和计时控制部件、毛细管和样品瓶及缓冲液瓶的位置变换控制部件等共同构成该进样系统。


2. 毛细管清洗装置和缓冲液填充系统:

酸碱活化毛细管能够使CE 分离结果得到保证,另外,其中一个必须进行的步骤便是填充缓冲液。通常通过正压或负压来实现毛细管清洗或缓冲液,对于系统的密闭性有一定的要求。商品化的仪器的压力控制机构由毛细管清洗过程与进样过程共用,然而进样精度会受到计时以分钟为单位的影响。


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3. 毛细管及其温控系统:

CE 分析实验过程中,焦耳热效应会使得分离效率降低,并且在一定程度上会对分析结果的重复性产生影响。所以为了焦耳热效应同时对外界温度变化对毛细管分离结果造成的影响有所规避,需要设计一个温度可调的恒温环境。比较常用的温控方式为风冷和液冷两种。风冷是通过控制空气对流实现控温,然而效果不理想。液冷控温是在恒温液体中放入毛细管置,冷却介质通常是水,冷却或恒温由专门的制冷系统进行并经由流路进行循环。液冷控温具有非常良好的效果,因此,液冷控温方式较为常用。


4. 检测系统:

CE 使用Z广泛的检测器微紫外检测器,其采用柱上检测方式,操作方便,结构简单,使用之前需要在适当位置剥离毛细管外壁涂层的弹性保护层聚酰亚胺膜,将透明部分对准光路。实现涂层剥离的方法包括烧、硫酸腐蚀或者刀片刮除等。


对仪器的一般要求

对于所有采用毛细管电泳法测定的品种,分析模式、检测方法(如紫外光吸收或荧光检测器的波长、电化学检测器的外加电位等)应该严格遵守该品种项下的规定,其他如毛细管内径、长度、缓冲液的pH值、浓度、改性剂添加量、运行电压或电流的大小、运行的时间长短、毛细管的温度等的测定参数都可以对该品种项下规定的数据进行参考,以所用仪器的条件和预试验的结果为依据进行必要的调整。

缓冲液为电极槽和毛细管内的溶液,能够将有机溶剂加入成为改性剂,和将表面活性剂加入,叫做运行缓冲液。在使用运行缓冲液之前应该脱气。迁移时间是指电泳谱中各成分的出峰时间。胶束之于胶束电动毛细管色谱如同固定相之于液相色谱。然而其随电渗流在毛细管内迁,因此随胶束的流出,容量因子为无穷大的成分也终会流出,其他各种参数均和液相色谱所用的一致。


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最近更新:2023-09-14 11:51:19
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