紫外分析仪RAPD常用问题和解决方法

紫外分析仪分为很多系列，有三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、可照相紫外分析仪等系列，不同的紫外分析仪有不同的用途。紫外分析仪采用不同波长引进电泳分析、检测，PCR产物检测，DNA指纹图谱分析，纸层分析或薄层分析等。

解决方法

质量产物呈弥散状

1、检查凝胶的制备是否使用了正确的缓冲液。

2、电泳时保持比较低的电压。

3、将DNA浓度降低。

4、将凝胶上样量减少。

5、将循环数减少。

带谱重复

仅对主要条带进行考虑。

染色后太强的凝胶背景

1、产物在更高浓度的琼脂糖凝胶、专业纯凝胶或聚丙烯酰胺凝胶上进行分离

2、将染色时间减少。

3、延长凝胶脱色时间。

没有扩增或扩增偏差

1、对母液重新配制，将引物浓度提高或者使用不同的引物。

2、在PCR程序中的第二部分将退火时间延长，或者将升温转换步骤之间的速率降低。

3、将每个反应中的Taq聚合酶的浓度提高。

4、将新的组分补充加入，使用高压将该灭菌的灭菌。

5、某一组分在部分或全部管中缺少，为了对所有的PCR组分都已加入进行确定，重复少量几个反应。

6、PCRYZ物能够和DNA一起纯化，使得DNA的浓度发生改变。

7、将一个清洗步骤（如苯酚抽提）加入到DNA分离中。

8、对新的DNA溶液进行稀释。

单一带

对引物序列不是回文结构进行确认，使用不同的引物。

很难分辨结果

1、对Taq聚合酶活性进行检查

2、对DNA浓度进行改变。

3、对Taq聚合酶缓冲液进行更换。

4、对引物进行检查