液相色谱串联质谱仪操作规程

液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS）标准化操作规程

在现代精密分析实验室中，液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS）凭借其极高的灵敏度和选择性，已成为药物代谢、环境监测及食品安全检测的核心工具。质谱系统对操作的规范性要求极严。一份标准的操作流程不仅能延长耗材寿命，更是确保数据重现性的基石。

仪器启动与系统平衡

在开启仪器前，需确认实验室环境满足要求：温度稳定在20-25℃，湿度保持在40%-60%。首先检查高纯氮气（纯度≥99.999%）和氩气的压力，确保气源充足。

开启液相色谱模块后，必须对流动相进行彻底脱气。推荐使用超声脱气20分钟或在线脱气机。随后进行流路冲洗，初始流速建议设定在0.1-0.2 mL/min，观察压力曲线是否平稳。当基线波动小于0.5 mAU（UV检测器辅助）或压力波动小于0.5%时，方可认为系统达到初步平衡。

质谱参数优化与质量轴标定

质谱端的稳定性决定了定量结果的准确度。在正式分析前，应执行质量轴标定（Mass Calibration）和仪器性能检查。使用标准的调谐液（如PPG或聚四氟乙烯衍生物）对质谱质量轴进行校准，确保质量偏差在0.1 Da以内。

针对特定目标物，需通过针泵进样进行MRM（多反应监测）条件优化。关键在于寻找响应值高的前体离子和碎片离子，并精确设定碰撞能量（CE）与去簇电压（DP）。

样品采集与实时监测

样品处理是质谱分析中容易引入误差的环节。待测样品须经过0.22 μm有机系滤膜过滤或高速离心（>12000 rpm），以防堵塞色谱柱或喷针。

在进样序列中，每隔10-20个未知样品应插入一个质控样品（QC）和溶剂空白。通过监控内标物（IS）的响应波动，判断是否存在基质或离子源污染。若内标响应波动超过30%，则需重新评估样品前处理方法或清洗离子源。

核心操作参数参考清单

下表列出了常规ESI源分析时的典型控制指标，供从业者在建立方法时参考：

离子源维护与系统关机

实验结束后的处理直接影响次日的仪器状态。首先使用高比例水相（如90%水/10%甲醇）冲洗系统，去除流路中的缓冲盐，随后切换至纯乙腈或甲醇保压。

对于离子源部分，建议每日实验后使用异丙醇/水（50/50）溶液擦拭喷针和锥孔，减少基质堆积。关机时，先关闭加热气和喷雾电压，待离子源温度降至室温后再关闭真空泵，以防真空油倒吸进入分析器。

故障排查的专业逻辑

当遇到灵敏度突然下降时，从业者应遵循“由外及内”的排查原则。先确认流动相配比是否有误，再检查ESI喷针是否发生堵塞或位置偏移。若压力异常升高，应依次段开连接管路以定位堵塞点，通常位于在线过滤器或保护柱前端。

保持一份详尽的仪器使用记录日志，包括每日的背景噪音水平和关键化合物的峰形数据，是实现预测性维护的核心。通过数据趋势分析，可以在故障发生前识别出耗材耗竭的征兆。