紫外分析仪RAPD影响因素

紫外分析仪分为很多系列，有三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、可照相紫外分析仪等系列，不同的紫外分析仪有不同的用途。紫外分析仪采用不同波长引进电泳分析、检测，PCR产物检测，DNA指纹图谱分析，纸层分析或薄层分析等。

影响因素

污染

由于引物、各种缓冲液和双蒸水都会导致污染，因此空白对照应在实验中设立。

反应物

多种成分会对PCR扩增起到制约的作用，产物的指数式增长只在部分循环中有所体现，逐渐会达到一个平台期。如果模板和引物浓度足够理想，那么就会有多态性丰富、强弱带分明的RAPD图谱产生。

引物

引物3端似乎有着更大更加重要的作用。除此以外，如引物二聚体的形成和产物的特异性等反应的参数也受到Mg+2浓度的影响。不同的范围大约在1.5－4mmol/L内，不同的结论由人们在各自的实验中得出。总而言之，应当事先筛选优化各种反应物的浓度。

模板

模板浓度

PCR扩增的关键制约因素之一是模板，模板决定了RAPD产物，实验中十分关键的一个步骤是保证模板的浓度非常精确。如果浓度过高，那么会使得非专一性扩增产物增加；如果浓度过低，那么就不会有较高的分子碰撞机率，存在非常大的偶然性，扩增产物不稳定。更加值得注意的是，如果控制不好循环数，就会过早地将引物消耗光，在后续的循环中会导致不等长度的延伸。所以如果原模板有过高的浓度，背景就足以能够由非专一性扩增产物形成，高浓度模板导致弥散型产物就是这个缘故。

模板纯度

相对来说，影响较小的是模板纯度，也就是反应液中蛋白质、多糖、RNA等大分子物质有着比较小的影响。

温度

92－95摄氏度为变性的温度范围，94摄氏度为变性常用的温度，30－60秒为变性的时间范围；72摄氏度为延伸的温度，60－120秒为变性的时间范围；35－37摄氏度为退火的温度范围，30－60退火的时间范围。较高的退火温度，会增加引物和模板结合的特异性，退火温度偏低，引物和模板结合特异性就会较差，会增加出现的条带数量。

在设计程序和结果分析时对各种仪器会有不同的控温、升降温性能要事先考虑。因此，非常有必要对所用仪器的生产厂家、品牌、规格进行注明，同一批实验将反应控制在同样的温度条件下，得出的结果才有比较的必要。

温度的梯度率非常重要，尤为重要的是退火与延伸之间的梯度。

有人表示，采用33－34摄氏度作为退火的温度在目的为寻找基因差异的实验中会获得更加好的效果。在优化方案中，可能会提高退火温度，从而使得背景降低，使得少而清晰的"带"获得。