基因扩增仪的基本要素、反应条件及反应步骤

简而言之，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，大体上，其是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。如今常用的技术，能够把一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。

基本要素

1.水以及四种脱氧核苷酸

2.DNA聚合酶

3.引物

4.DNA模板 

工作原理

利用升温让DNA变性，在聚合酶的作用下使单链复制成双链，从而达到基因复制的目的。

反应条件

温度、时间和循环次数为PCR反应条件。

温度设置：

以PCR原理基础对变性-退火-延伸3个温度点进行设置。在标准反应中，当温度达到90~95℃时，双链DNA会变性，然后将温度快速冷却至40~60℃，引物退火且在靶序列上结合，再将温度快速提升到70~75℃，在 TaqDNA聚合酶的作用下，沿模板延伸引物链。

反应时间：

变性的时间通常为2~3分钟，能够让模板DNA完全变性。复性时间通常是30~60秒，引物与模板之间完全结合的时间充足。待扩增片段的长度决定了PCR延伸反应的时间，通常1kb以内的DNA片段，延伸时间1min绰绰有余。

循环次数：

PCR扩增程度根据循环次数而定。PCR循环次数主要以模板DNA的浓度为依据，通常选择的循环次数在30-40次之间，非特异性产物的量随着循环次数的增多而变多。

反应步骤

反应的步骤为Denaturation- Annea领 of primers-Extension of primers。Denaturing指的是将DNA加热（至90~95℃）变性，使得双股的DNA变为单股的DNA来当做复制的模板。而Annea领却是在一定的温度下（冷却至55~60℃）使得 Primers在模板DNA两端附着，Z后加热使得温度达到70~75℃在DNA聚合酶的作用下对引物进行延伸以及合成另一股DNA。