培养基分装仪培养基制备的注意事项
培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等;根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。
培养基配成后一般需测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,Z好现配现用。
培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管,均改制成粉末。
培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。为了防止污染应该注意以下事项:
对工作细胞库是否被污染进行确认,对毒种工作种子批是否被污染进行确认,对所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染进行确认,都能够通过细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时需要验证无菌试验培养基的灵敏度。实际生产中,能够将营养琼脂加入到取出的少量的配制好的培养液中,在恒温培养箱内培养,48小时就能够观察有无污染。
其它:验证高压灭菌设备、过滤CJ设备,从而使灭菌和CJ效果得以确保,高压灭菌设备应在投产前及其后的每6个月进行验证,过滤CJ设备应在每次CJ前、后进行验证工作(至少应在CJ后进行一次)。
此外,应严格分开有毒区与无毒区,并空气净化系统及孵室各自独立,有毒区对无毒区应保持相对负压,避免病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。
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